ELISA法检测HIV抗体的几点体会.doc

PAGE PAGE 1 ELISA法检测HIV抗体的几点体会 刘国刚钟海明胡金元中华医学实践杂志2004年10月第3卷第10期 　　【文献标识码】B【文章编号】1684-2030（2004）10-0907-01 　　进入20世纪90年代，HIV在我国迅速传播，感染人数成倍增长（据《全国防治工作》1990年AIDS/HVI报告数2/299人，2002年AIDS/HIV1028/9732人，估计实际人数是报告人数的10倍）。HIV感觉的诊断以HIV抗体的检现为金标准，为了达到早诊断、早治疗、早管理的目的，全国先后建立了大量的HIV抗体初筛实验室。出于实验条件的限制，大部分实验室仅能做常规的HIV抗体初筛工作，很少对HIV病毒做深层次的研究。现简述我科用ELISA法检测HIV抗体的几点体会。 　　1试剂方面 《全国检测技术规范》（2003版）批准的初筛试剂有酶联免疫、颗粒凝集和其它快速诊断试剂。对于试剂本身的质量问题，试剂的稳定性、敏感性和特异性等指标，由于基层实验室不能得到血清转化盘和大量的阳性标本，不可能进行自己测定，只能看试剂厂家的批检报告和每年国家有关部门的临床评估报告，所以在购买试剂时索取和审查厂家提供的批批检报告至关重要。在操作中，试剂在测定前一定要在室温下恒温30min，如果不经过恒温过程，储存温度和室温的差异会使酶标板上凝集一些小水珠，也使开始反应的温度不恒定，影响到抗原抗体的结合与反应的速度。在储存上，一般在2～8℃，特别注意试剂盒不能紧贴冰箱储存室后壁摆放，否则试剂会被冰冻，复融后试剂的总体效价将严重偏低，不能使用。 　 　　2样品方面 　ELISA试剂对于样本要求不高。我们曾做了许多溶血、脂肪血和黄疸性血清以及加了EDTA抗凝剂的血浆样本，结果均为阴性，没有假阳性出现，说明一些生物因素和抗凝剂对阴性结果不产生影响，但所做均为阴性样品，而无阳性样品，各类因素是否会对阳性样品产生影响还有待探讨。值得注意的是，反复冻融的样品会使抗体的效价降低很多，甚至出现假阴性结果。我们曾经用同一批号的试剂对同一阳性样品反复冻融后测定，第1、2、3次冻融之间OD值下降很快，第4次测定已降至灰区，成为一个不确定样品。 　3所用仪器方面 ELISA方法所用仪器相对简单。洗板机的使用出现了这样的问题:洗板机的吸液针头要接触酶标板的板底才能吸干净，而触碰板底将会对包被物产生影响;手工洗板容易溢液和污染。我们做了手工洗板和机洗板的比较，除了手工洗板比机洗板空白值略低外，其它没有区别。用洗板机有3个地方要注意:（1）是洗两个不同厂家的酶标板时，应注意调整吸液头的下降高度，以免因高不适使冲洗针头卡住酶标板;（2）是当吸液针头有破损时，吸液端由平端变为尖锐，板底包被物被破坏可能性增加，对结果影响较大，应及时更换;（3）是溢液的问题，洗液不足洗不干净（特别是边缘残留的酶标物），洗液太多容易溢出，这就要求不断调整洗液量，洗不同厂家试剂的酶标板洗液量可以不同。移液器要按时校正;酶标仪效果将更好。 总的来说，ELISA试剂发展已相对成熟，对样本要求不高，只要注意其中的诸多影响因素，注意试剂的储存和仪器的保养，严格按照说明书操作，就可以避免出现假阴性。 　　作者单位:201500上海市金山区疾病预防控制中心