课件：志贺氏菌检测.pptVIP

志贺氏菌在伊红美兰平板上 大肠杆菌在伊红美蓝琼脂平板上 2、分离和初步生化试验 挑取平板上的可疑菌落，接种三糖铁琼脂和葡萄糖半固体各1管。一般应多挑几个菌落，以防遗漏，经36℃培养18-24h，分别观察结果。 葡萄糖半固体原理及结果 附:三糖铁琼脂现象及原理分析 三糖铁（TSI）琼脂试验的原理 试验方法：以接种针挑取待试菌可疑菌落或纯培养物，穿刺接种并涂布于斜面，置36±1℃培养18-24h，观察结果。 附:三糖铁琼脂现象及原理分析 三糖铁琼脂(TSI)成分：蛋白胨20.0g;牛肉膏3.0g; 乳 糖10.0g; 蔗糖10.0g; 葡萄糖1.0g ;硫酸亚铁铵(含6个结晶水) 0.5g;酚红 0.025g或5g/L溶液5mL;氯化钠5.0g;硫代硫酸钠0.5g;琼脂 12.0g;蒸馏水 1000.0mL 除酚红和琼脂外,将其他成分加入400mL蒸馏水中,搅拌均匀,静置约10min,加热煮沸至完全溶解,调至pH7.4±0.1。另将琼脂加入600mL蒸馏水中,搅拌均匀,静置约10min, 加热煮沸至完全溶解。将上述两溶液混合均匀后,再加入酚红指示剂,混匀,分装试管(12mm×100mm),每管约2～4mL,高压灭菌121℃ 10 min或115℃15 min,灭菌后置成高层斜面,呈桔红色。 三糖铁琼脂原理分析： 本培养基适合于肠杆菌科的鉴定。用于观察细菌对糖的利用和硫化氢（变黑）的产生。该培养基含有乳糖、蔗糖和葡萄糖的比例为10:10:1，只能利用葡萄糖的细菌，葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸，因接触空气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱性产物，故使斜面后来又变红，底部由于是在厌氧状态下，酸类不被氧化，所以仍保持黄色。 而发酵乳糖的细菌(e.coli)，则产生大量的酸，使整个培养基呈现黄色。 如培养基接种后产生黑色沉淀，是因为某些细菌能分解含硫氨基酸，生成硫化氢，硫化氢和培养基中的铁盐反应，生成黑色的硫化亚铁沉淀。 下面照片所示2-3-4，可能是大肠杆菌、沙门氏菌还是志贺氏菌？ 答案：2－志贺氏菌　3－沙门氏菌　4－大肠杆菌 (3)　下述培养物可以弃去：　a.　在三糖铁琼脂斜面上呈蔓延生长的培养物；(无鞭毛无动力)　b.　在18-24h内发酵乳糖、蔗糖的培养物(不发酵乳糖,仅宋内志贺氏菌迟缓发酵乳糖)；　c.　不分解葡萄糖和只生长在半固体表面的培养物；(分解葡萄糖,兼性厌氧)　d.　产气的培养物；(分解葡萄糖产酸不产气)　 　e.　有动力的培养物；(无动力)　f.　产生硫化氢的培养物。(不产生硫化氢)　　　凡是乳糖、蔗糖不发酵，葡萄糖产酸不产气(福氏志贺氏菌6型可产生少量气体)，无动力的菌株，可做血清学分型和进一步的生化试验。 三、血清学分型 挑取三糖铁琼脂上的培养物，做玻片凝集试验。 先用4种志贺氏菌多价血清检查，如果由于K抗原的存在而不出现凝集，应将菌液煮沸后再检查；如果呈现凝集，则用A1、A2、B群多价和D群血清分别试验。如系B群福氏志贺氏菌，则用群和型因子血清分别检查。福氏志贺氏菌各型和亚型的型和群抗原见表1。可先用群因子血清检查，再根据群因子血清出现凝集的结果，依次选用型因子血清检查。 4种志贺氏菌多价血清不凝集的菌株，可用鲍氏多价1、2、3分别检查，并进一步用1-15各型因子血清检查。如果鲍氏多价血清不凝集，可用痢疾志贺氏菌3-12型多价血清及各型因子血清检查。 血清 诊断血清:是应用已知的标准菌株,免疫家兔获得. 多价(混合)诊断血清:该血清含有两种(或型)以上细菌的相对应性抗体. 单价诊断血清:该血清仅含有一种(或型)细菌的对应性抗体. 因子诊断血清:含有多种抗原成分的细菌,免疫动物所获得的抗血清,应用与该细菌含有共同抗原成分的其他细菌进行凝集素吸收试验,将血清中共同的抗体吸收,余下的仅一种(或一部分)特异性抗体成分,称为因子血清. 抗O诊断血清:用菌体抗原(O抗原)免疫动物,获得的抗血清称抗O诊断血清. 抗HO诊断血清:用有菌体抗原(O抗原)和鞭毛抗原(H抗原)的细菌免疫动物,获得的抗血清称抗HO诊断血清. 表面抗原诊断血清:应用含表面抗原,如Vi抗原K抗原等细菌，经过处理，免疫动物所获得的抗血清，称．如Vi诊断血清． 四、进一步的生化试验 在做血清学分型的同时，应做进一步的生化试验，即： 葡萄糖铵 西蒙氏柠檬酸盐 赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶 pH7.2尿素 KCN生长 水杨苷和七叶苷的分解 除宋内氏菌和鲍氏13型为乌氨酸阳性外，志贺氏菌属的培养物均为阴性结果。 四、进一步的生化试验 必要时还应做革兰氏染色检查和氧化酶试验，应为氧化酶阴性的革兰氏阴性杆菌。生化反应不符合的菌株，即使能与某种志贺氏菌分型血清发生凝集，仍