类受体激酶StLRPK1参与的抗病信号途经分析-蔬菜学专业毕业论文.docxVIP

华中农业大学2016届硕士学位(毕业)论文3．2 华中农业大学2016届硕士学位(毕业)论文 3．2 VIGS沉默MAPK途径关键基因 23 3．2．1 VIGS沉默NbSIPK对抗性的影响 ．．23 3．2．2 VIGS沉默NbWIPK对抗性的影响 ．．25 3．3亚细胞定位 ．27 3．3．1载体构建 27 3．3．2亚细胞定位 ．28 3．4酵母双杂交 ．．29 3．4．1酵母双杂交eDNA文库扩增 29 3．4．2诱饵蛋白自激活检测 30 3．4．3点对点验证StLRPKl与StBAKl互作 30 3．4．4酵母双杂交eDNA文库筛选 3 1 3．5转录组测序 ．32 第四章讨论 ．35 4．1 StLRPKl提高本氏烟草对马铃薯晚疫病菌88069的抗性 ．35 4．2 StLRPKl介导的晚疫病抗性更依赖WIPK ．36 4．3 StLRPKl在识别PAMPS和信号向下游传导中发挥作用 ．．36 4．4 StLRPKl通过激酶信号途径调控对晚疫病的抗性 37 4．5研究展望 ．38 参考文献 ．39 附表1 0 h RI相对E3下调表达的基因 ．49 附表2 0 h RI相对E3上调表达的基因 52 附表3 24 h RI相对E3下调表达的基因 ．．53 附表4 24 h RI相对E3上调表达的基因 ．．58 致谢 ．60 Ⅱ 万方数据 类受体激酶StLRPKl参与的抗病信号途经分析摘要 类受体激酶StLRPKl参与的抗病信号途经分析 摘要 马铃薯(Solanum tuberosum L．)是世界第四大粮食作物。晚疫病是马铃薯生产 中面临的最大威胁，病害爆发导致大规模减产。前期研究中克隆到一个类受体激酶 基因StLRPKl，初步研究表明StLRPKl对马铃薯晚疫病具有广谱抗性。本研究以超 量表达StLRPKl的转基因本氏烟草为材料，进一步研究StLRPKl在晚疫病抗性中的 作用，探究StLRPKl介导的抗病信号传递途径，解析StLRPKl的抗病机制。主要结 果如下： 1．利用卡那霉素抗性筛选方法筛选得到超量表达StLRPKl的纯合本氏烟草株系。 纯合株系接种晚疫病原菌小种88069进行抗性鉴定，结果表明StLRPKl超量株 系晚疫病抗性显著高于对照。 2．利用qRT-PCR分析了超量表达StLRPKl本氏烟草株系接种前后PTI marker基 因表达。未接种晚疫病菌时，与野生型相比，超量株系中PTI相关marker基因 呈上调表达趋势：病原菌诱导24 h表达分析显示，在超量株系中多个PTI抗性 相关基因更大幅度上调表达，证明StLRPKl可以通过调控下游PTI抗性相关基 因的表达来提高对晚疫病的抗性。 3．利用VIGS系统探索了StLRPKl参与的信号途径。结果显示VIGS沉默NbSIPK 后野生型和超量株系出现相同程度抗性下降，说明NbSIPK不参与StLRPKl介 导的抗性，VIGS沉默NbWIPK后超量株系抗性下降程度显著高于野生型，表明 StLRPKl可能通过NbWIPK传递抗病信号。 4．利用烟草叶片瞬时表达体系对StLRPKl进行亚细胞定位，结果显示StLRPKl定 位于细胞膜上。 5．用StLRPKl激酶域构建酵母双杂交诱饵载体，筛选马铃薯．病原菌互作蛋白 eDNA文库，没有筛选到互作蛋白，在StLRPKl与StBAKl的点对点杂交实验 中没有检测到互作。 6．转录组分析表明，干涉StLRPKl的马铃薯株系与对照E3相比，多个蛋白激酶组 成型下调表达，诱导24 h后，更多激酶相对下调表达的同时大量转录因子下调 表达。StLRPKl可能通过多个激酶信号途径调控对晚疫病的抗性。 关键词：马铃薯， 晚疫病，StLRPKl， VIGS，蛋白互作PTI 万方数据 华中农业大学2016届硕士学位(毕业)论文Abstract 华中农业大学2016届硕士学位(毕业)论文 Abstract Potato(Solanum tuberosum L．)iS the fourth most important cultivated crop worldwide．Late blight，caused by oomycete pathogen Phytophthora infestans，is the devastating disease of potato．T11e outbreak of this disease led to large scale production lost．＆LRPKi，which Was cloned by our、ab in the previous research,was identified as a 1eucine rich repeat rece