课件：精液实验室的规范操作温氏集团内部资料.pptVIP

THANK YOU SUCCESS * * 可编辑 规范操作 计数板计算密度 红细胞计数法：该法最准确，但速度慢，其具体操作步骤为： 用不同的微量取样器分别取具有代表性的原精100微升和3%的KCl溶液900微升，混匀。在计数板的计数室上放一盖玻片，取少量上述混合精液放入计数板槽中。在高倍显微下计数5个中方格内精子的总数，将该数乘以50万即得原精液的精子密度。 规范操作-精检 50万的来由 在计数板上会标有“1/400”的字样，这是表示一个小方格的面积S1=1/400mm2； 计数板的高度为H1=0.1mm； 从以上两项则得出：一个计数室的体积为：V1=1/400 mm2×16（一个中方格有16个小方格）×25（一个计数室有25个中方格）×0.1mm=0.1mm3； 假定我们数5个中方格的总精子数为n个；则一个计数室的总精数为5n； 1ml=1cm3=（10mm）3=103mm3=104V1；则V1=10-4 ml 我们现在计算出1：10稀释后的密度（即1 ml内有多少个精子）： C1=5n个/10-4 ml=5n×104个； 原精的密度C=10C1（原精通过1：10稀释做成计数板）=5n×105个 =50万×n=0.005亿×n 所以我们1：10稀释做计数板，则数出5个中方格的总精数乘以0.005则得出该份精液原精的密度。 如果我们是1：20倍稀释则应乘以0.01，似此类推。 规范操作 精检 6、精子活力 精子活力的高低与受配母猪的受胎率和产仔数有较大的关系。因此，每次采精后及使用精液前，都要进行活力的检查，检查精子活力前必须使用37℃左右的保温板预热：一般先将载玻片放在38℃保温板上预热2至3分钟，再滴上1小滴精液，盖上盖玻片，然后在显微镜下进行观察。精子活力一般采用10级制，即在显微镜下观察一个视野内作直线运动的精子数，若有90%的精子呈直线运动则其活力为0.9；有80%呈直线运动，则活力为0.8；依次类推。新鲜精液的精子活力以高于0.7为正常，稀释后的精液；当活力低于0.65时，则弃去不用。 规范操作 精检 7、畸型率：畸形精子包括巨型、短小、断尾、断头、顶体脱落、有原生质滴、大头、双头、双尾、折尾等精子。它们一般不能作直线运动，受精能力差，但不影响精子的密度。公猪的畸形精子率一般不能超过18%，否则应弃去。采精公猪要求每两周检查一次畸形率。 规范操作 –精检 畸型精子图 精子形状 精子形状 规范操作 –稀释 精液稀释的目的 1、扩大精液的体积：经稀释后一次采得的精液可供10－30头母猪配种。 2、提供精子生存所需的营养物质：精子一旦形成，只能消耗周围介质中的营养物质来维持其活动。 3、使精子休眠，延长其存活时间和受精能力：弱酸性的环境能抑制其活动，弱碱性的环境则促进精子的活动，所以稀释液要求呈弱酸性以抑制其运动，延长其寿命。 4、抑制精液中有害微生物的活动和繁殖，减少母猪因配种感染疾病的机会。如精液稀释液中常用抗生素有青霉素与链霉素。 5、便于精子的保存和运输。 规范操作 –稀释 稀释液的配制 1、配制稀释剂要用精密电子天平，不得更改稀释液的配方或将不同的稀释液随意混合。配制好后应先放置1小时以上才用于稀释精液，液态稀释液在4℃冰箱中保存不超过24小时，超过贮存期的稀释液应废弃。抗生素的添加，应在稀释精液前加入到稀释液里，太早易失去效果。 规范操作 –稀释 稀释液的配制 2、所用药品要求选用分析纯，对含有结晶水的试剂按摩尔浓度进行换算。 3、按稀释液配方，用称量纸和电子天平按1000ml和2000ml剂量准确称取所需药品，称好后装于密闭袋中。 4、使用1小时前将称好的稀释剂溶于定量的双蒸水中，用磁力搅拌器加速其溶解。 5、如有杂质需要用滤纸过滤。 6、稀释液配好后及时贴上标签，标明品名、配制时间和经手人等。 7、放在水浴锅内进行预热，以备使用 8、认真检查配好的稀释液，发现问题及时纠正。 规范操作-稀释 稀释时注意事项 1、稀释精液必须在恒温环境中进行，避免精液温度的急剧下降。 2、稀释时，严禁太阳光直射精液，阳光对精子有极强的杀伤力。 3、稀释液应在采精前准备好，并预热。且保持有两至三个温度剃度，以便采集后能尽快稀释。 4、尽快1：1稀释。 5、备用两根温度，一根测精液温度，一根测稀释液温度，且应校正好。 6、避免高倍打击。 7、等温