课件：生物制药学九基因治疗与反义药物.ppt

自杀基因的作用机制尚不完全清楚，有可能是直接细胞毒性效应、旁观者效应、促进免疫反应等的综合结果 直接细胞毒性是指高毒性的药物直接将肿瘤细胞杀死 在前体药物存在的情况下，基因改造的肿瘤细胞能引起未经改造细胞的细胞毒性和死亡 自杀基因／前体药物促发的免疫反应的原理目前也不分清楚 二、基因治疗与艾滋病 艾滋病又称获得性免疫缺陷综合症，是由于人免疫缺陷病毒HIV感染，特异性地破坏了免疫细胞CD4＋，使机体发生免疫缺陷，造成机体发生肿瘤、机会性感染的一种致死性疾病 HIV病毒是单链的RNA逆转录病毒，其外壳糖蛋白Gp120可以和CD4特异性高亲和力结合，使CD4＋T细胞减少，并使细胞因子的分泌功能受阻，引起机体的免疫缺陷 1. 反义核酸 用互补于mRNA的DNA或RNA，在细胞内形成双链分子，阻碍mRNA的剪接、运送、翻译，降低mRNA的稳定性，从而影响病毒基因的表达与复制。 目前需要解决的问题是反义核酸的专一性转移和进入靶细胞之前的降解 2. 核酶 核酶是具有催化RNA自我剪切反应的核酸，目前报道的核酶是在培养细胞上干预HIV基因的表达 核酶的稳定性比较低，生理条件下反应缓慢是其用于抗HIV的不足之处，同时针对它在机体内是怎样被转录和转录后抗RnaseH的能力还需进一步研究 3. 可溶性CD4分子的表达 编码CD4的基因已经得到了克隆，并已经在真核系统中表达。将CD4分子的编码基因通过逆转录病毒载体导入到外周淋巴细胞、骨髓造血干细胞、血管内皮细胞、血管平滑肌细胞中得到表达，表达出来的CD4分子可以与入侵的HIV病毒包膜蛋白Gp120结合，竞争性地保护CD4＋T淋巴细胞不受或少受感染 4. 特异性抗体的诱导 诱导机体产生抗HIV的特异性抗体也是抗HIV治疗的一个重要方法，将gp120的基因导入人体中表达，诱导抗包膜蛋白Gp120的体异性抗体，不仅可以诱导产生IgG，而且可以引发特异性的细胞免疫 5. Tat蛋白突变体表达 Tat蛋白在HIV病毒基因的复制和转录过程中有着极为重要的反式调控作用，将突变体形式的tat基因导入人体后，突变体的大量表达，竞争性地结合Tat受体位点，抑制或干扰HIV病毒基因组的正常复制和转录功能 6. 艾滋病疫苗 第六节 反义技术概论 一、反义技术与反义核酸 反义技术是指用人工合成或生物合成的核酸分子,抑制、封闭、破坏靶基因的技术。反义技术中的核酸分子可以是DNA，RNA或者肽核酸 反义技术中所用的核酸，一般又称为反义核酸，就是根据碱基互补配对原理，结合并调节靶基因活性的核酸分子 通过反义技术制备的药物，就是人们常说的反义药物 由于反义技术也是针对基因进行的治疗，所以反义药物从某种意义上讲，也是属于基因治疗的范畴 狭义的基因治疗侧重于基因表达的上调性，而反义技术则侧重于基因表达的下调性 二、反义核酸药物特点 1）高度特异性 反义药物通过特异的碱基互补配对作用于把RNA或DNA，可以区分基因结构上的细微差异 2）高效性 反义药物是直接作用于与核酸或调控因子，可以在基因的转录或翻译水平上发挥药物作用 3）最优化的药物设计 针对靶基因的序列进行简单的、理性化设计 4）低毒、安全 反义药物还没有发现有显著的毒性，最终都会被代谢掉 5）制备简单 核酸的合成容易，可以大规模生产，成本比较低 三、反义技术的分类 1. 反义脱氧核苷酸（ODN） 又称反义DNA，通过与mRNA的结合形成DNA-RNA杂合体，从而影响基因的表达调控。 由于DNA序列合成仪的广泛使用，所以ODN很容易获得 2. 反义RNA 反义RNA是与能mRNA序列互补配对形成双链复合物的RNA片段，影响基因的翻译 3. 核酶 核酶存在于生物细胞中，是一类具有催化活性的RNA分子，具有核酸酶的水解活性，可以特异性地剪切RNA分子 4. 三链形成寡核苷酸（TFO） 三链形成寡聚核苷酸是指可与双链或单链DNA形成三股链，从而抑制基因转录的寡核苷酸 5. 肽核酸（PNAS） 肽核酸是以肽为骨架的DNA类似物，是用手性不对称的中性肽链骨架置换脱氧核糖磷酸而成 四、反义技术原理和方法 一、反义脱氧核酸 天然存在未经修饰的磷酸二酯脱氧化核苷酸（PO－ODN）作为反义药物虽然有和靶RNA发生特异序列结合，激活Rnase H的活性，但是在生理条件下，PO-ODN对核酸酶很敏感，易被快速降解，限制了它的实际使用 1. 第一代――硫代寡聚核苷酸（PS-ODN） 以一个硫原子取代了核酸中磷酸的非桥羟基上的氧原子 显著地提高了化合物在各种环境中对核酸酶的稳定性，而且保留了在交亲和性以及对RnaseH的激活活性 第一个获得美国FDA批准的反义药物弗米韦新