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微柱凝胶技术在新生儿溶血性疾病诊断中的研究 马吉联林就孟黄向华梁金凤黄敏菁姜设初赖春征 (广西壮族自治区贵港市人民医院广西贵港537100) 基金项目：贵港市科技局科研项目：贵科攻关1105024,业字(2011) 5号 文【摘要】目的：探讨微柱凝胶技术在ABO血型不合新生儿溶血病(Hemolytic disease newborn,HDN)相关实验中与传统试管法的比较研究。方法：对339例母 婴血型不合疑似ABO-HDN的新牛儿用传统试管法和微柱凝胶法进行肓接抗球蛋 白试验、游离试验和放散试验。结果微柱凝胶法、试管法检测结果分别为直接抗 球蛋白实验结果阳性82例、口8例，阳性率24.2%、阳性率34.8%两法有显著性 差异(Plt;0.05)；游离试验阳性239例、202例，阳性率70.5%,阳性率59.6%, 两法有显著性差异(Plt;0.05)；释放试验阳性260例、205例，阳性率76.6%、 阳性率61.4%,两法有显著性差异(Plt;0.05)o结论：直接抗球蛋白实验，传统 试管法比微柱凝胶法阳性率更高，灵敏度更高；但在游离试验及释放试验中，微 柱凝胶法比传统试管法阳性率更高、灵敏度也更高。微柱法试验操作简便、易于 标准化，耗时短，标木用量少，结果直观明了等优点，阳性率高，与临床诊断符合率高, 在临床新牛儿溶血性疾病的诊断与治疗中有重要意义。 【关键词】新牛儿溶血；ABO血型不合直接抗球蛋白试验放散试验游离试验 【中图分类号1R272.1L文献标识码】B【文章编号11003-5022013)10?0497?01 新牛儿溶血病(hemolytie diease of the newborn)指母婴血型不合引起的胎 儿或新生儿免疫性溶血性疾病，主要见于0型母亲、A型或B型胎儿，也可见于 Rh等血型系统。胎儿或新牛儿红细胞被来自母亲的免疫性IgG抗体包被，并在 婴儿的单核■巨噬细胞系统内受到免疫性破坏，病情严重程度不同，严重者可胎 死宫内，临床上轻微溶血的患儿由血清学试验能检出［1L木文研究的是，对临 床上疑似新牛儿溶血病的患儿血样木，分别用微柱凝胶卡式法和传统试管法进行 三项试验，并进行对应比较。现将检测结果分析如下： 1材料与方法 1.1研究对象:2010年4月至2012年12月在贵港市人民医院住院因高胆红 素血症疑为ABO HDN的患儿共339例，母 婴血型为O A者为150例Q B者为177例，A B者为5例，0 AB者为7例。 1.2仪器与试剂达亚美恒温空气孵育器，达亚美专用离心机，达亚美微柱凝 胶血型卡，低离子抗人球蛋白卡，上海血液生物医药有限公司的ABO标准红细 胞，长春博讯生物技术有限公司的酸放散试剂。 1.3方法 1.3.1微柱凝胶法:ABO标准红细胞配制成0.8%?1.0%红细胞悬液待用，取母 婴EDTA抗凝全血，1000g离心5分钟，分别进行ABO血型及RhD血型鉴定。（1） 直接抗球蛋白试验：①取新生儿离心后压积红细胞，用稀释液配0.8%的红细胞 悬液。②将50ul±述红细胞悬液加入微柱凝胶孔，离心10分钟判读结果。（2） 游离试验：①取与新生儿同型的A型或B型和0型0.8%的标准红细胞各50ul加 入抗人球蛋白卡中，然后各孔加入25ul新生儿血浆。③放孵育器孵育15分钟， 机离心10分钟，观察结果。（3）释放试验：①取患儿离心后压积红细胞洗涤4 次。②最后一次倾去洗涤液，保留部分上清液，检测是否存在不规则抗体。③在 洗涤的细胞中，加入等量的酸放散液，混匀，室温静置1?2, 1000g离心2分钟， 立即将上清放散液液移入另一干净试管,④在上述放散液中按100ul加入10-16UI 的中和液，边加入边观察，至呈现粉红色或肉色，表示PH约（6.5~7.5）。1000g 离心1分钟⑤分别取0.8%A或B型和O型红细胞悬液50ul加入抗人球蛋白卡中， 各个孔再加入放散液50uL⑥放孵育器孵育15分钟，离心10分钟，观察结果。 1.3.2试管法：（1）直接抗球蛋白试验：患儿压积红细胞用生理盐水洗涤3 次，配成2%红细胞悬液，取小试管两支分别标记：“直抗”、“盐水”，在直抗管 中加入50ul的抗球蛋白试剂，然后在两管中各加50ul受检红细胞悬液，混匀后 立即以3400转/分1000g离心15秒，判读结果。同时做阴、阳性对照。（2）游 离抗体试验：取小试管三支，分别标记“Ac”“Bc”“0c”，每管加患儿血清100ul, 分别加入3%A、B、O型酶处理红细胞悬液50ul, 37°C水浴1小吋后取出，若凝 集，证明存在抗体。若不凝集，生理盐水洗涤3次，在各管中加入抗球蛋白试剂 50ul,以3400转/分离心15秒，观察结果。 （3）放散试验（热放散法）取压积红细胞lml,用生理盐水洗涤3次，加入等 量的生理盐水