乳与乳制品病原微生物检验方法沙门氏菌的检验.doc

乳与乳制品病原微生物检验方法沙门氏菌的检验 YLNB 4.3 方法一：国标法 1. 仪器及器材 1.1 冰箱：0-4℃ 1.2 恒温培养箱：36℃±1℃ 1.3 显微镜：10×——100× 均质器或灭菌乳钵 天平：0-500g，精度0.5g 灭菌试管：10mm×100mm、16mm×160mm 灭菌吸管：1ml（具0.01ml刻度）、10ml（具0.1ml刻度） 灭菌锥形瓶：500ml、100ml 灭菌培养皿：直径90cm 灭菌小试管：3mm×50mm 灭菌毛细管。 2. 培养基和试剂 2.1缓冲蛋白胨水(BP)：按GB 4789.28中4.12规定。 2.2 氯化镁孔雀绿(MM)增菌液：按GB 4789.28中4.13规定。 2.3 四硫酸钠煌绿(TTB)增菌液：按GB 4789.28中4.14、4.15规定。 2.4 亚硒酸盐胱氨酸(SC)增菌液：按GB 4789.28中4.16规定。 2.5 亚硫酸铋琼脂(BS)：按GB 4789.28中4.19规定。 2.6 DHL琼脂：按GB 4789.28中4.20规定。 2.7 HE琼脂：按GB 4789.28中4.21规定。 2.8 WS琼脂：按GB 4789.28中4.23规定。 2.9 SS琼脂：按GB 4789.28中4.22规定。 2.10 三糖铁琼脂：按GB 4789.28中4.26，4.27规定。2.11 蛋白胨水、靛基质试剂：按GB 4789.28中3.13规定。2.12 尿素琼脂(pH7.2)：按GB 4789.28中3.15规定。2.13 氰化钾(KCN)培养基：按GB 4789.28中3.16规定。2.14 氨基酸脱羧酶试验培养基：按GB 4789.28中3.12规定。2.15 糖发酵管：按GB 4789.28中3.2规定。2.16 ONPG培养基：按GB 4789.28中3.3规定。2.17 半固体琼脂：按GB 4789.28中4.30规定。2.18 丙二酸钠培养基：按GB 4789.28中3.7规定。2.19 沙门氏菌因子血清：按26种用于初步分型；57种用于进一步分型；163种用。 3. 检验程序 直接增菌法鲜肉、鲜蛋、鲜乳或其他未经加工的食品 25g+灭菌生理盐水25ml,做成检样匀液 直接增菌法 鲜肉、鲜蛋、鲜乳或其他未经加工的食品 25g+灭菌生理盐水25ml,做成检样匀液 前增菌法 冻肉、蛋品、乳品及其他加工食品 25g+BP 225ml 36℃±1℃ 一般4h 干蛋品18 h—24h 检样匀液25ml+SC 100ml检样匀液25ml+MM（或TTB)100ml10ml+SC100ml10ml+MMA(或TTB)100ml 检样匀液25ml+ SC 100ml 检样匀液25ml+ MM（或TTB)100ml 10ml+SC100ml 10ml+MMA (或TTB)100ml 42℃ 18 h—24h 36℃±1℃ 18 h—24h 42℃ 18 h—24h 36℃±1 18—24h BSDHL(或HE、WS、SS) BS DHL(或HE、WS、SS) 36℃±1℃ 40h—48h 36℃±1℃40h-48h 挑取可疑菌落 挑取可疑菌落 TSI(斜面、底层、产气、H TSI(斜面、底层、产气、H2S),蛋白胨水（靛基质），尿素（PH7.2），KCN，赖氨酸 非如左述的各种反应结果H2Sˉ 靛基质ˉ尿素ˉKCN 非如左述的各种反应结果 H2Sˉ 靛基质ˉ 尿素ˉKCNˉ 赖氨酸+/- H2S+ 靛基质+ 尿素ˉKCNˉ 赖氨酸+ H2S+ 靛基质ˉ 尿素ˉKCNˉ 赖氨酸+ ONPG甘露醇 ONPG 甘露醇 沙门氏菌血清学实验非沙门氏菌非沙门氏菌 沙门氏菌 血清学实验 非沙门氏菌 非沙门氏菌 沙门氏菌 血清学实验 报 告 报 告 4. 方法 4.1 前增菌和增菌 冻肉、蛋品、乳品及其他加工食品均应经过前增菌。各称取检样25g，加在装有225mL缓冲蛋白陈水的500mL广口瓶内。固体食品可先应用均质器以8000～10000r/min打碎1min，或用乳钵加灭菌砂磨碎，粉状食品用灭菌匙或玻棒研磨使乳化，于36±1℃培养4h(干蛋品培养18～24h)，移取10mL，转种于100mL氯化镁孔雀绿增菌液或四硫酸钠煌绿增菌液内，于42℃培养18～24h。同时，另取10mL，转种于100mL亚硒酸盐肮氨酸增菌液内，于36±1℃培养18～24h。　　鲜肉、鲜蛋、鲜乳或其他未经加工的食品不必经过前增菌。各取25g(25mL)加入灭菌生理盐水