山奈酚调节LPS及高糖诱导的RAW264.7细胞M1_M2表型转化保护足细胞损伤的体外研究.pdfVIP

目 录 中文摘要I 英文摘要IV 常用缩写词中英文对照表VIII 前 言1 1 材料与方法2 1.1 研究对象2 1.2 实验材料2 1.3 方法5 1.4 统计学分析11 2 结 果12 2.1 山奈酚清除DPPH 的IC 值及ORAC值 12 50 2.2 高糖和LPS诱导巨噬细胞向M1型极化模型的建立12 2.3 山奈酚在高糖及LPS环境下对RAW264.7细胞生长的影响作用14 2.4 山奈酚对高糖及LPS诱导巨噬细胞产生NO 的影响作用16 2.5 山奈酚对高糖及LPS诱导巨噬细胞M1/M2 表型转化的影响作用17 2.6 山奈酚对高糖及LPS诱导巨噬细胞产生IL-1β的影响作用20 2.7 山奈酚对LPS及高糖损伤足细胞的直接作用21 2.8 山奈酚经巨噬细胞对高糖及LPS损伤足细胞的间接作用23 3 讨 论25 4 结 论29 4.1 山奈酚的抗氧化活性29 4.2 高糖及LPS诱导巨噬细胞分型的作用29 4.3 山奈酚对高糖及LPS诱导巨噬细胞分型的影响作用29 4.4 山奈酚对高糖及LPS诱导巨噬细胞生成NO及IL-1β的影响作用29 4.5 山奈酚对高糖及LPS诱导足细胞损伤的影响作用29 参考文献30 综 述34 致 谢41 个人简介42 山西医科大学硕士学位论文 山奈酚调节LPS及高糖诱导的RAW264.7细胞M1/M2表型转 化保护足细胞损伤的体外研究 摘 要 目的： 1、研究山奈酚的体外抗氧化作用。2、研究山奈酚对脂多糖 （LPS）和高糖诱 导的小鼠RAW264.7 巨噬细胞向经典活化型 （M1）及替代活化型 （M2）转化的影 响作用。3、比较山奈酚对LPS和高糖诱导足细胞损伤的直接作用、及经巨噬细胞 分型保护足细胞损伤的间接作用。 方法： 1、采用氧自由基清除能 （ORAC）法和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼 （DPPH）法 测定山奈酚的抗氧化活性。2、Griess 法测定不同浓度高糖及LPS对RAW264.7 细 胞生成一氧化氮 （NO）的影响作用，确定巨噬细胞向M1型转化的高糖浓度。3、 CCK8法确定在LPS及高糖环境时，不同浓度的山奈酚对巨噬细胞生长的影响作用。 4、Western Blot 测定在高糖及LPS 作用下，M1型极化的标志物肿瘤坏死因子-α （TNF-α）、M2 型极化的标志物甘露糖受体 （CD206）和精氨酸酶1 （Arg-1）的蛋 白表达变化，并检测山奈酚对各蛋白表达的影响作用。5、Griess法检测山奈酚对高 糖及LPS两个模型组诱导NO 生成的影响作用，ELISA 检测山奈酚对模型组产生白 细胞介素1β （IL-1β）的影响作用。6、MTT 法研究山奈酚对高糖及LPS致足细胞 损伤的影响作用。7、分别收集对照组、高糖、LPS及山奈酚培养巨噬细胞的上清液 （（对照组）MS、 （高糖）MS、 （LPS）MS及 （山奈酚）MS）培养足细胞，观 察山奈酚通过干预巨噬细胞分型、对高糖及LPS致足细胞损伤的影响作用。 结果： 1、山奈酚清除DPPH 的半数抑制浓度 （IC ）为 （5.3± 1.1）µg/ml，显著低于 50 I 山西医科大学硕士学位论文 阳性对照2,6-二叔丁基对甲酚 （BTH）的IC 值 （38.8± 2.5）µg/ml （P 0.05）； 50 山奈酚的ORAC值为（2678± 272）µmolTE/g，显著高于阳性对照维生素C 的ORAC 值 （2028± 196）µmolTE/g （P 0.05）。2、在33.3mM 高糖及 1.0 µg/m