抗菌药物敏感试验课件 .pptVIP

* G-菌产生的头孢菌素酶检测 -----头孢哨噻吩滤纸片法 用接种环挑取受试菌于头孢哨噻吩（产色头孢菌素）滤纸片上(商品化)， 10分钟内由浅黄色转变为粉红色即阳性结果， 表示头孢菌素的β-内酰胺环被酶打开。 临床意义：产生该酶的细菌对头孢菌素类抗生素耐药。 * G+菌产生的青霉素酶检测 -----碘淀粉测定法 受试菌混于青霉素溶液，振摇30分钟。加入淀粉液后，再加入碘液，溶液变蓝，继续振摇。 10分钟之内蓝色消失者为产酶株。 青霉素酶 青霉素 青霉素噻唑酸 碘 碘淀粉复合物变为无色 多为金黄色葡萄球菌产生，对青霉素G耐药。 * 超广谱β-内酰胺酶Extended-Spectyumβ-Lactamase，ESBL ESBLs 能水解青霉素类，头孢菌素和氨曲南。 不能水解碳青烯酶类，如亚胺培南 多数可被β内酰胺酶抑制剂（如克拉维酸，三唑巴坦及舒巴坦）所抑制。 如为ESBL阳性，则对青霉素类，头孢菌素和氨曲南均报告耐药，不考虑体外药敏结果。 * 5.盖上平板的盖子，放置培养箱内孵育，放置3~10分钟后贴上标准抗生素纸片。 * 6.用无菌镊子或纸片分配器将抗菌纸片粘贴于M-H琼脂的表面，一旦纸片贴上，不能移动；各抗菌纸片中 心距离应大于24mm，纸片距平板内缘应大于15mm。 * 7.经过35℃16～24h孵育。 8.取抑菌环直径， 根据CLSI标准，报告细菌对该抗生素敏感、耐药、中介。 * 纸片扩散法质量控制 培养基：M-H平板厚度，4 mm 细菌悬液：0.5麦氏标准的细菌浓度 药敏纸片的质量 各抗菌纸片中心距离应大于24mm， 纸片距平板内缘应大于15mm。 9cm的平板贴6个 培养时间 质控菌株 ↗ ↗ ↘ ↗ 抑菌圈直径？ ↘ ↘ ↗ * * 根据抑菌圈的直径，依照CLSI标准，作出敏感、耐药、和中介的判断。为‘‘ 定性”结果。 CLSI推荐的最简单的药敏试验。 纸片扩散法的特点 * 三、E试验法（浓度梯度法） 原理： E试条是一条5mm×50mm无孔试剂载体，一面固定有一系列预先制备的浓度呈连续指数增长的抗菌药物，另一面有判别的刻度。抗菌药物的梯度可覆盖有15--20个对倍稀释浓度的宽度范围。 将E试条放在细菌接种过的琼脂平板上，经孵育，围绕试条明显可见椭圆形抑菌圈，圈的边缘与试条交点的刻度浓度即为抗菌药物抑制细菌的MIC。 依照CLSI标准判断其敏感、耐药、中介。 256 128 8 016 * 无菌生长区 有菌生长区 * 椭圆形细菌生长抑制区 256 128 8 016 判读抑菌浓度 （MIC ug/ml) * * * E test 法特点 优点 连续浓度梯度，与琼脂稀释法相关性好（相关系数为0.9）.可测MIC。 操作简单，影响因素少，稳定性高。 缺点：E试条较昂贵; 不适用于生长缓慢的苛养菌。 * 用于病原菌尚未确定的急、重症感染的经验治疗,以扩大病原治疗的覆盖面 治疗多种细菌所引起的混合感染 对于某些耐药菌可取得协同抗菌作用 减少或推迟治疗过程中细菌耐药性的产生 避免药物达到毒性剂量。 四、联合药物敏感试验 联合药物意义 * 增强作用：两种抗生素联用的效果大于它们单独使用时的效果之和； 20％～25％ 相加作用：它们联用时的效果等于单用两种抗生素效果之和； 60％～70％ 无关作用：两种抗生素联用的效果，仅相当于其中一种具有较强作用的抗生素的效果； 拮抗作用：两种抗生素联用时的效果反而小于它们分别使用时的效果之和。 10％～15％ 两种药物的联合使用的效果 * 两种抗菌药物作用部位不同： β－内酰胺类抗生素（抑制细菌细胞壁合成）与氨基糖苷类抗生素（干扰细菌的代谢）。 增强作用：增加了药物进入细菌细胞 杆菌肽（降低细胞通透性）与氨基糖苷类药物（干扰细菌的代谢）。 拮抗作用：降低了药物进入细菌细胞 抗菌药物协同作用发生原理 * 棋盘稀释法 利用肉汤稀释法原理，依据两种药物的MIC， 以棋盘设计两种药物不同浓度的组合。 计算抑菌浓度指数（fraction inhaibitory concentration,FIC) 联合药物敏感试验方法 * 棋盘稀释法 首先分别测定拟联合的抗菌药物对检测菌的MIC。 药物最高浓度为MIC的2倍，对倍稀释。 两种药物的稀释分别在方阵的纵列和横列进行，这样在每管（孔）中可得到不同浓度组合的两种药物混合液。 接种菌量为5×105CUF／ml，35℃孵育18