【培训课件-临床色谱质谱检验技术】_液相色谱质谱技术（二）.pptVIP

大气压化学电离源（APCI） 大气压化学离子化原理 以正离子模式为例 1、液体分子转化 为气体分子 2、放电使 源内O2或N2 分子电离 3、O2或N2离 子将电荷转移 给溶剂分子 4、溶剂离子 将电荷转移 给目标分子 5、目标离子进 入质量分析器 大气压化学电离源（APCI） 优点 有一定挥发性的中等极性或低极性的小分子化合物 对溶剂选择、流速和添加物的依赖性较小 缺点 有可能发生热裂解 样品需要有一定的挥发性 适合分析分子量小于2000 Da 的样品 根据样品性质选择离子化方式 适合ESI的样品类型 高极性化合物，蛋白质、肽类、低聚核苷酸等生物大分子 胺类、季铵盐 含杂原子化合物，如氨基甲酸酯 适合APCI的样品类型 弱/中等极性小分子，如脂肪酸、邻苯二甲酸、多环芳烃类、兴奋剂、激素等 含杂原子化合物，如氨基甲酸酯、脲类 APCI or ESI——样品的极性 米诺地尔（Minoxidil） 莫米松（Mometasone） 正离子模式 碱性样品，含有仲氨或叔氨时，容易得到一个H，带正电荷，形成[M-H]+ 可用乙酸或甲酸对样品加以酸化，促进离子化 3-甲氧基肾上腺素 （Metanephrine） 去甲变肾上腺素 （Normetanephrine） 酸性样品，能丢失一个H，形成[M-H]-，可用氨水或三乙胺对样品进行碱化，促进离子化 或含有较多电性基团，如含-OH，能丢失一个H，易带上负电荷，形成[M-H]- 负离子模式 游离皮质醇 （Cortisol） 雌二醇（Estradiol） 鹅脱氧胆酸（Anthropodesoxycholic acid） 雌酮（Estrone） 三重四极杆质量分析器（QQQ） 优势：主要用于中小分子化合物的定量分析。同时也可做一些已知物定性，给出分子离子峰、碎片。 缺点：浓度太高、太杂的样品会造成MS的污染。 离子阱质量分析器（TRAP） 优势：主要用于定性，尤其对可能未知物的确认（较TOF最大特点是可以对离子进行进一步的碎裂，以便确定其官能团、结构等），如合成后的产物及杂质、体内的可能代谢产物。 缺点：灵敏度没有QQQ高，分子量范围较QQQ窄。 飞行时间质量分析器（TOF） 优势：主要用于定性，也可以用于定量，扫描速度快，给出的分子量比较准确（分辨率和质量精度都高于QQQ、TOF），而且对大分子有优势（扫描质量范围宽）。 缺点：灵敏度没有QQQ高，选择性相对QQQ 的MRM模式要低。 质谱方法建立——质量分析器的选择 其他串列式多级质谱仪 串联四极杆混合线性离子阱质谱仪（QTRAP） 可同时达到高灵敏度和准确定性的统一，一针进样可同时得到定量和定性分析结果。 四极杆-飞行时间串联质谱仪（QTOF） 在临床分析中，可用于临床药物滥用筛查及临床毒物筛查（快速中毒急救分析），疾病标志物分析、诊断代谢组学等 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪（MALDI-TOF-TOF） 分子量范围宽，分辩率、分子量的准确性高 适合于高通量的蛋白质鉴定，进行蛋白质组学研究；疾病相关的生物标志物研究；蛋白质的翻译后修饰分析等 质谱方法建立——质量分析器的选择 三重四极杆质量分析器（Triple Quadrupole Mass Spectrometer，TQMS） MS1 MS2 碰撞活化分解(Collision activated dissociation, CAD) 碰撞活化分解在碰撞室内进行，选择一定质量的离子作为母体离子，进入碰撞室，室内充有惰性气体（碰撞气体： N2、He、Ar、 Xe、CH4等） ，发生离子-分子碰撞反应，从而产生‘子离子’，再经MS2的分析器及接受器得到子离子质谱，为了使离子碰撞碎裂，必须使离子具有一定动能。 影响CAD的因素有：所用碰撞气体的种类，压力，离子的能量，仪器的配置以及离子电荷状态 子离子扫描（Product Scan） Q1选择性扫描，Q3全扫描 适合化合物结构解析 质谱方法建立——扫描方式的选择 过滤母离子 扫描子离子 质谱方法建立——扫描方式的选择 母离子扫描（Precursor Scan，PS） Q1全扫描，Q3选择性扫描 适合同系物分析 扫描母离子 过滤子离子 质谱方法建立——扫描方式的选择 中性丢失扫描（Neutral Loss Scan，NL） Q1全扫描，Q3全扫描 适合中性碎片的分析 扫描母离子 扫描子离子 质谱方法建立——扫描方式的选择 多反应监测（Multiple reaction monitoring，MRM） Q1选择性扫描，Q3选择性扫描 适合对含有复杂基质的临床样品中的痕量目标化合物进行高精确度和高灵敏度的实时监测定量分析，也有益于化合物的结构分析。 过滤子离子 过滤母离子 1、样本经过色谱分离后，通过接口依次进入质谱仪的离子源被离子化，离子在质量分析