医学免疫学：细菌接种 药敏 生化 血清凝集.pptVIP

* * 尿素酶试验原理 尿素 尿素酶 氨+CO2 培养基pH升高 酚红呈碱性变色（红） * * 血清学试验 血清学鉴定： 用已知抗体鉴定未知的细菌或标本中的抗原 * * 血清学鉴定 试剂（诊断血清） ：含抗体 检测对象：特异性抗原 方法：直接凝集试验（玻片法）、荚膜肿胀试验 伤寒杆菌诊断血清 （含抗伤寒杆菌抗体） + 待检测细菌 细菌凝集 玻片凝集试验：阳性 报告：检出伤寒杆菌 * * 血清学诊断 试剂：含已知抗原 应用：检测待检者血清中有无相应的抗体以及抗体的效价 * * SS平板的原理: SS为强选择性培养基.其成分除了有必要的营养 成份外，还含有选择性抑制剂和缓冲剂。 如柠檬酸钠、胆盐、硫代硫酸钠的协同作用及 煌绿共同来抑制肠道非病原性细菌及部分大肠杆菌 的生长。 * * 1.克氏双糖鉄琼脂培养基试验 由于KIA培养基含乳糖、葡萄糖、硫酸亚铁铵和酚红指示剂。酚红在pH7.4时为红色，细菌分解糖产酸时则变为黄色。因此， 底层穿刺中可以观察细菌动力，对葡萄糖发酵的能力及是否产生硫化氢； 斜面可观察细菌对乳糖的发酵情况。肠道致病菌多不发酵乳糖，因此可以区别肠道内的致病菌和大肠埃希菌。　　 2.培养基：克氏双糖鉄琼脂培养基。 　　. * * 3.方法： 可疑菌落穿刺和斜面划线接种，35℃培养18～24h观察结 果。 4.结果：碱性（K），酸性（A） 　　K/K：不发酵碳水化合物，为不发酵菌特征。 　　K/A：葡萄糖发酵，乳糖不发酵，理如志贺菌。 　　K/A（黑色）：葡萄糖发酵，乳糖不发酵并产生硫化氢，如沙门菌。 　　A/A：葡萄糖和乳糖发酵，如大肠埃希菌和克雷伯菌属。 5应用：主要用于革兰阴性杆菌，尤其是肠杆菌科细菌的鉴定。 * * * * 谢 谢 ! * * 细菌接种及分离培养 目的要求： 掌握微生物的接种技术，学会微生物的一般培养方法 * * 检查病人标本（如痰等）是否存在某种病原菌时，需先将各种细菌分离，以获得纯培养，然后进一步观察形态结构和研究其生物学特性。 平板、半固体、液体、斜面 * * 常用培养基种类 厌氧培养基 基础培养基 增菌培养基 选择培养基 鉴别培养基 * * 细菌的生长现象 培养基 组成 生长现象 主要用途 液体培养基 0.3% 牛肉膏 1% 蛋白胨 0.5% NaCl 均匀混浊 沉淀生长 表面生长(菌膜) 增菌 固体培养基 （平板、斜面） 液体培养基 ＋ 1-2% 琼脂 菌落(colony) 菌苔(mossy) 分离培养 纯培养，增菌 半固体培养基 液体培养基 ＋ 0.5% 琼脂 沿穿刺线生长 穿刺线模糊 观察动力 保存菌种 * * 细菌接种方法 平板分区划线分离法 接种混合菌液（金大） 斜面、液体 接种细菌任选一种 半固体 观察动力（大肠或痢疾） 平板：一块/每人； 其它：2 人一套 * * 1区(1/10) 4区 3区 2区(1/5) 烧接种环 平板分区划线法 * * 平板四区划线方法 IV II I 1/5 I 1/10 旋转 90? 转 90? 转 90? III 1/4 * * 固体培养基 菌落 菌苔 * * 液体接种 * * 液体培养基 沉淀生长 混浊生长 表面生长 * * 斜面接种 * * 半固体培养基： 无动力 有动力 * * 细菌药敏试验 * * 主要耐药菌株 耐甲氧西林的金葡菌（MRSA）、 多重耐药的革兰氏阴性杆菌（绿脓、不动杆菌）  延缓耐药株形成、指导用药、开发新药 * * 一、药敏试验种类 1、 纸片扩散法 2、稀释法 * * * * 步骤 1. 划平板 不分区， 首先划“十”字，然后尽可能均匀涂抹。 2. 贴纸片 * * 细菌分解代谢 根据细菌具有不完全相同的酶， 分解不同营养物质的特点， 用生化方法来鉴定细菌 称：细菌的生化反应 细菌的生化反应 * * 对 糖 的 发 酵 甲基红试验 单糖发酵试验 VP试验 对 蛋白质的分解 吲哚试验 硫化氢试验 其它试验 枸橼酸盐利用试验 尿素酶试验 临床常用的生化反应 * * 糖发酵试验 原理 多糖－→单糖－→丙酮酸－→酸性产物(或产酸产气)－→pH↓ －→指示剂呈酸性变色(若产气者有气泡出现) 培养基：糖发酵管、半固体发酵管、微量发酵管 试剂：酚红、溴甲酚紫等 结果:培养基呈酸性变色 应用：观察细菌对糖度的 分解情况，常用于肠道杆菌的鉴定 * * 糖发酵试验结果判断 反应现象 结果描述 酸性变色、有气泡 分解××糖产酸、产气 酸性变色、无气泡 分解××糖产