微生物限度检查方法适用性验证专项方案.docVIP

微生物程度检验方法适用性试验方案 验证方案组织和实施 微生物程度检验方法适用性试验工作应由质量管理部门负责组织，质量管理部门相关人员组成验证小组，参与实施。 方案起草 部门/职务 签 名 日 期 质量管理部QC 方案审核 部门/职务 签 名 日 期 质量管理部QC经理 方案同意 部门/职务 批 准 人 批 准 日 期 质量管理部质量总监 目 录 概述 验证目标和风险评定 验证内容 四、方法判定 五、再验证周期 六、参考文件 七、结果评价及结论 1、概述： 微生物程度检验法系检验非要求灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度方法。检验项目包含需氧菌数、霉菌数和酵母菌数及控制菌检验。当建立产品微生物程度检验法时，应进行需氧菌、霉菌和酵母菌计数方法适用性试验和控制菌检验方法适用性试验，以确定所采取方法适合于该产品需氧菌、霉菌和酵母菌数测定和控制菌检验。 依据中国药典20XX版，需氧菌、霉菌和酵母菌及控制菌均采取平皿法进行方法适用性试验。 2、试验目标和风险评定： 验证目标：确定所采取需氧菌、霉菌和酵母菌计数方法及控制菌检验方法适合我企业所生产产品微生物程度检验。 风险评定： 项目 潜在失效模式 失效影响 采取方法 未按方案实施 试验部分项目出现偏差和漂移 直接影响试验结果 正确性 严格实施经同意 试验方案 试验过程操作不妥 未达成试验标准 试验失败 未严格遵照试验方案要求 3、验证内容： 3.1、培养基起源： 品名 批号 规格 起源 确定人： 确定日期： 3.2、检验用培养基配制方法： 培养基名称 配制方法 PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液 取本品14.63g，加水1000ml，加热溶解，分装，121℃，15分钟灭菌，备用。 胰酪大豆胨琼脂培养基 取本品40g，加水1000ml，加热溶解，分装，121℃，15分钟灭菌，备用。 胰酪大豆胨液体培养基 取本品30.0g，加水1000ml，加热溶解，分装，121℃，15分钟灭菌，备用。 沙氏葡萄糖液体培养基 取本品30.0g，加水1000ml，加热溶解，分装，121℃，15分钟灭菌，备用。 沙氏葡萄糖琼脂培养基 取本品65.0g，加水1000ml，加热溶解，分装，121℃，15分钟灭菌，备用。 麦康凯琼脂培养基 取本品50.0g，加水1000ml，加热溶解，分装，121℃，15分钟灭菌，备用。 麦康凯液体培养基 取本品35.0，加水1000ml，加热溶解，分装，121℃，15分钟灭菌，备用。 确定人： 确定日期： 3.3、使用仪器 名称 型号 校验单位 使用期至 数显电热恒温培养箱 数显霉菌培养箱 确定人: 确定日期： 3.4、验证试验用菌种： 菌种名称 代号 传代代数 起源 金黄色葡萄球菌 大肠埃希菌 铜绿假单胞菌 枯草芽孢杆菌 白色念珠菌 黑曲霉菌 确定人： 确定日期： 3.5试验方法： 取供试品10 ml加PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml→1:10供试液。需氧菌、霉菌和酵母菌、控制菌采取常规法。 3.6菌液制备： 3.6.1取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌胰酪大豆胨琼脂斜面培物一铂金饵，加入胰酪大豆胨液体培养基中置30～ 35℃培养箱中培养18～24h，取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌胰酪大豆胨液体培养物1ml加入9ml0.9％无菌氯化钠溶液中，制成10-1 菌液，依法10倍稀释至10～7， 分取各菌悬液1ml注入平皿中，立即倾注胰酪大豆胨琼脂培养基20ml，各菌悬液平行制备两个平皿，平皿法培养计数，取小于100CFU/ml和1000CFU/ml菌液备用。 3.6.2取白色念珠菌沙氏葡萄糖琼脂斜面培养物，加入沙氏葡萄糖液体培养基中置20～25℃培养箱中培养24～48h，取白色念珠菌沙氏葡萄糖液体培养物1ml加入9ml0.9％无菌氯化钠溶液中，制成10-1 菌液，依法10倍稀释至10～7，取菌悬液1ml注入平皿中，立即倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基25ml，各菌悬液平行制备两个平皿，平皿法培养计数，取小于100CFU/ml和1000CFU/ml菌液备用。 3.6.3取黑曲霉新鲜培养物接种子沙氏葡萄糖琼脂斜面上，20-25℃培养5-7天，加入3-5ml含0.05%聚山梨酯800.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。取1ml加入含0.05%聚山梨酯809ml 0.9%无菌氯化钠溶液中，制成10-1 菌液，依法10倍稀释至10～7，取，取菌悬液1ml注入平皿中，立即倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基2