分子生物学-13-4-第七章原核基因表达调控-Arb.docVIP

PAGE 郜刚分子生物学教案 7.4.1 半乳糖操纵子(galactose operon) 结构基因包括3个： 异构酶(galE) 乳糖-磷酸尿嘧啶核苷转移酶(galT)半乳糖激酶(galK)。 这3个酶的作用是使半乳糖变成葡萄糖-1-磷酸。 半乳糖操纵子特征： 具有双启动子 猜想与意外: 从前面的Lac操纵子可以知道，葡萄糖是大肠杆菌优先利用的碳源来生长，似乎是： 有简单的糖，就不会利用复杂的糖。 用同样的思路去考虑半乳糖gal操纵子时，人们发现意外： 无论有没有葡萄糖， gal操纵子都能被诱导，而且 gal操纵子总有本底水平的组成型合成。 gal操纵子的特点： ① 它有两个启动子，其mRNA可从两个不同的起始点开始转录； ② 它有两个O区，一个在P区上游，另一个在结构基因galE内部。 gal操纵子P-O区中存在两个相距仅5bp的启动子，可以分别起始mRNA的合成。每个启动子拥有各自的RNA聚合酶结合位点S1和S2。 功能分析 P1功能:控制结构基因编码分解利用半乳糖的酶类，作为用于细菌生长的碳源；用量大，非必须，具有诱导性。 P2功能：控制结构基因利用半乳糖作为细胞壁合成的前提物质——尿苷二磷酸半乳糖；用量小，必须，是组成型。 如果只有一个依赖于cAMP-CRP的启动子P1,当培养基中有葡萄糖时，就不能合成异构酶，细胞壁就受到威胁；所以要有一个不依赖于cAMP-CRP的启动子(P2), 如果只有一个不依赖于cAMP-CRP的启动子(P2),那就意味着即使有葡萄糖存在，半乳糖操纵子也要充分表达，这就是一种浪费。所以需要有调节基因对这个启动子加以控制 由于启动子2是不依赖于cAMP-CAP的启动子，所以无论有没有葡萄糖的时候，cAMP-CAP无论能否合成，都不影响它的启动，因此启动子2总是保持一种本底水平的转录。为什么是“本底水平”，是因为阻遏蛋白的原因：半衰期？！ 由于启动子1是依赖于cAMP-CAP的启动子，尽管半乳糖作为诱导物，解除了Gal O1的阻遏，但是仍然需要葡萄糖调节，因为cAMP-CAP的浓度取决于葡萄糖！ 像Lac操纵子一样，通常Gal1操纵子是受到阻遏蛋白的阻遏，是关闭的。而半乳糖（诱导物）可以诱导阻遏蛋白，解除它的阻遏作用，按理说启动子1应该开放。 但是如果细胞中有葡萄糖存在，就算解除了阻遏作用，启动子1仍然是关闭的，因为有葡萄糖存在，细胞中的cAMP就是低浓度的，而启动子1是依赖于cAMP-CAP的，而这时cAMP-CAP的浓度很低，所以启动子1仍然关闭。其结果是什么呢？只有大肠杆菌消耗掉葡萄糖之后，才能合成cAMP，启动子1才能开放。这就是它的经济原则。【如果是参赛此处可以加入情感教育，以煽动人心】 因此只有在没有葡萄糖的时候，同时又有半乳糖的时候，启动子1才是开放的 为什么gal操纵子需要两个转录起始位点？ （涉及半乳糖在细胞代谢中的双重功能） 半乳糖两个作用： 可以作为唯一碳源供细胞生长; 与之相关的物质--尿苷二磷酸半乳糖（UDPgal）是大肠杆菌细胞壁合成的前体。 而启动子也有两个： galP1起始的转录——无内源葡萄糖、有外源半乳糖时进行，以保证碳源的供应。 galP2起始的转录——有内源葡萄糖、无外源半乳糖时进行，以保证细胞壁的合成需要。 ?生理功能（可以理解为生物学意义？） 无论从必要性和经济性考虑，都要有一个不依赖于cAMP-CAP的启动子(s2) 进行本底水平的组成型合成，以及一个依赖于cAMP-CAP的启动子(s1),进行高水平的调节，这样既可以满足细胞最基本的需要（细胞壁），又可以满足在没有葡萄糖而有半乳糖时，细胞能够利用半乳糖进行生长。 进一步解释: gal P2是不依赖于cAMP-CRP的， 相反： cAMP-CRP对gal P2还起到一种抑制作用，这是因为其与结合位点的结合，会影响到RNA聚合酶对gal P2的利用。 因此教材上（page257）认为：只有S2活性完全被抑制时，（S1）的调控作用才是有效的。 7.4.2 阿拉伯糖操纵子（arabinose operon) araB基因、araA基因和araD, 形成一个基因簇，简写为araBAD 三个基因的表达受到ara操纵子中araC基因产物AraC蛋白的调控。C蛋白有三个结合位点O2、O1和 I 。 araC基因是araBAD的调节基因 AraC对AraBAD的负控制 Ara C结合到ara I 的时候，由于araBAD的启动子本身与ara I有部分重叠，另外还可以引起上游序列回折弯曲，使得AraC同时与O2结合，从而使CRP位点被占据，RNA聚合酶也不能结合到启动子上，araBAD基因不转录。同时由于占据了O1，也抑制了AraC的转录。其本质