亚精胺调控仔猪肠黏膜上皮细胞IPEC-J2增殖、迁移及炎性反应的机制研究.pdfVIP

摘 要 多胺是动物细胞生长必需的一类活性小分子，包括腐胺、亚精胺和精胺。腐胺是其他两种多 胺合成的前体物，三种多胺之间在多胺合成酶、多胺氧化酶和亚精胺/精胺乙酰转移酶的作用下可 以互相转化。本课题组前期研究发现，腐胺对猪肠粘膜上皮细胞（IPEC-J2 ）具有良好的促进细 胞增殖、迁移和抗炎的效果。但是还不清楚腐胺的这些功能是通过其本身起的作用还是通过其代 谢产物亚精胺或精胺起的作用。为此，我们以IPEC-J2 细胞为模型，通过添加多胺代谢通路抑制 剂DEGBG 和DFMO 阻断多胺之间的相互转化，来揭示多胺促进细胞增殖和迁移以及抗炎的作用 5 机理。IPEC-J2 细胞以0.5×10 个/mL 接种在96 孔板中，添加不同浓度亚精胺（1 μmol/L、2 μmol/L、 4 μmol/L、8 μmol/L、16 μmol/L、32 μmol/L 和64 μmol/L ）来研究亚精胺对IPEC-J2 细胞的增殖 作用并筛选出亚精胺适宜添加量。向培养基中添加不同浓度的DEGBG （0.25 mmol/L、0.5 mmol/L、 1 mmol/L 和2 mmol/L ）来确定抑制细胞内亚精胺生成的DEGBG 适宜添加水平。通过在IPEC-J2 细胞培养基中添加适宜剂量DEGBG 检测其对细胞增殖、迁移和炎症反应的作用，并使用LPS 刺 激作为细胞损伤模型。然后再添加亚精胺或腐胺，研究其对由于DEGBG 或LPS 引起的细胞损伤 的修复作用。提取细胞RNA 和蛋白质用于检测相关信号通路节点基因的表达。研究结果发现， 在培养基中添加1 μmol/L、2 μmol/L、4 μmol/L 、8 μmol/L 和16 μmol/L 的亚精胺都能促进IPEC-J2 细胞增殖，其中8 μmol/L 亚精胺促增殖效果最好。在培养基中添加1 mmol/L 的DEGBG 培养24 h 显著降低细胞内亚精胺水平，同时抑制IPEC-J2 的增殖。在含有DEGBG 的培养基中补充腐胺 并不能恢复IPEC-J2 的增殖速率，但在含有DEGBG 的培养基中添加亚精胺却可以恢复IPEC-J2 的增殖速率。添加DEGBG 对ERK 总蛋白的表达没有影响，但显著降低了磷酸化ERK 蛋白的表 达，外源添加亚精胺消除了对磷酸化ERK 蛋白表达的抑制作用。在培养基中添加DEGBG 也显 著抑制细胞的迁移，而外源添加亚精胺恢复了被抑制的细胞迁移。亚精胺可以抑制由LPS 引起的 细胞炎症因子TNF-α 表达的升高。在培养基中添加DEGBG 引起细胞炎症因子IL-8、IL-6、TNF-α、 COX-2 和 IL-1β 基因表达升高，而添加外源亚精胺可以抑制DEGBG 引起的IL-8、IL-6、TNF-α 基因表达升高。在培养基中添加DEGBG 对NF-κB 总蛋白表达没有影响，但提高了磷酸化NF-κB 蛋白表达，外源添加亚精胺会降低磷酸化NF-κB 的表达。本研究结果表明，腐胺是通过转化为亚 精胺来促进IPEC-J2 细胞增殖和迁移作用。正常情况下，亚精胺对细胞内的炎症因子表达没有影 响。但细胞内缺乏亚精胺会增加细胞炎症反应，而补充亚精胺又可以使炎症反应降低。我们的研 究结果为在仔猪上合理应用多胺和开发多胺为新型饲料添加剂奠定了理论基础。 关键词：细胞增殖，细胞迁移，抗炎，亚精胺，腐胺 I Abstract Polyamines, including putrescine, spermidine and spermine, are a class of active small molecules and necessary for animal cell growth. Putrescine is a precursor for the synthesis of spermidine and spermine. These three polyamines can be converted to each other by the enzymes of polyamine synthase, polyamine oxidase and spermidine/spermine acetylt