斑马鱼高尿酸血症模型构建及降尿酸功能食药材筛选.pdfVIP

摘 要 我国高尿酸血症发病率呈现出不断上升的趋势，严重影响人群健康，高尿酸血症的发病机制 及其治疗成为人们日益关注的问题。食药材具有安全性高、来源广、种类多、药物不良反应少等 特点，从食药材中发现天然降尿酸活性成分已成为高尿酸血症药物研究的重要组成部分。斑马鱼 具有成为优良高尿酸模型的潜力，通过利用斑马鱼在药物高通量筛选方面所具有的独特优势，可 作为筛选降尿酸药物的活性评价平台。在此基础上进行系统的降尿酸功能因子筛查，构建降尿酸 功能因子数据库，可为天然降尿酸药物的开发提供帮助。 本研究以高尿酸血症模型构建以及降尿酸食药材筛选为目标，选择斑马鱼为研究对象，以期 构建能够作为降尿酸药物高通量筛选的活性评价平台，在此基础上，对多种食药材的降尿酸功效 进行筛选和评价，为揭示其降尿酸功效以及进一步开发利用提供科学依据，为降尿酸药物的快速 筛选提供新的思路。本文的主要研究内容和结果如下： 1. 通过氧嗪酸钾和别嘌呤醇联合处理孵化第5 天的斑马鱼幼鱼，建立斑马鱼急性高尿酸血症 模型。以别嘌呤醇和鹅肌肽作为阳性对照，对模型进行初步验证。该模型的构建将为今后筛选有 效、安全的治疗高尿酸血症的食品和药物、高尿酸血症的研究以及发病机制的探讨提供一种新的 思路。 2. 根据黄嘌呤氧化酶 （XOD ）活性抑制，首先对 20 种食药材的降尿酸功效进行体外筛选， 红景天、兔耳草、牡丹皮、败酱草、黄柏、绿萝花、决明子和雪菊8 味中药在浓度400 μg/mL 时 抑制率达到50 ％以上，其中红景天XOD 活性抑制最强。 通过斑马鱼高尿酸血症模型，进一步验证了这8 种食药材乙醇粗提物的降尿酸活性。红景天 组，兔耳草低中高剂量组、牡丹皮高剂量组、败酱草中低剂量组、黄柏中高剂量组、绿萝花低中 高剂量组、决明子低高剂量组和雪菊低中高剂量组的尿酸水平均显著低于模型组（P0.05 ）。除败 酱草和决明子以外，其他6 种粗体物对尿酸水平的影响与浓度呈正相关，与体外XOD 活性抑制 的实验结果一致。其中，本研究首次报道了红景天、绿萝花、败酱草和雪菊的XOD 抑制活性和 降尿酸活性。 3. 利用HPD-100 大孔树脂对红景天成分进行初步分离，进而对分离各组分进行XOD 活性抑 制验证。大孔树脂50 % 乙醇，70% 乙醇，90 % 乙醇分离组分与红景天乙醇粗提物的XOD 抑制活 性相比都有所增强，IC50 值都有所降低，30 % 乙醇组分未显示出XOD 抑制活性。其中50 % 乙醇， 70 % 乙醇组分XOD 抑制活性几乎相同，90 % 乙醇组分XOD 抑制活性最强。 关键词：高尿酸血症，斑马鱼，降尿酸食药材，高通量筛选，红景天 I Abstract The incidence of hyperuricemia in China is growing, that affects the health of the population, therefore, the pathogenesis and treatment of hyperuricemia are more important. Edible herbs has the characteristics of high-level safety, wide sources, numerous varieties and few adverse drug reactions. The exploring of edible herbs has become an important part of the research on hyperuricemia therapy. Zebrafish has the potential of being an excellent hyperuricemia model with the advantages in medicine high-throughput screening. Zebrafish can be used as an evaluation platform for screening uric acid- lowering drugs an