临床PCR实验室的设计及质量管理标准体系的建立李金明.doc

临床PCR试验室设计及质量管理体系建立 卫生部临床检验中心 李金明 核酸（DNA和RNA）是生命现象基础。小到病毒、细菌等微生物，大到动植物和人类，全部无一例外。因为主导生命活动受体、细胞因子、酶、激素等均不过是核酸发挥功效作用表型，均由核酸决定，在核苷酸序列上哪怕是单个碱基变异，全部会引发表型完全改变，并进而影响生命功效发挥，造成疾病发生。所以，在核酸或称为基因水平上检测，对临床疾病本质揭示就要更深一步。也正因为核酸是生物体生命活动之源，对于感染性病原体检测，从核酸着手，最能反应病原体在机体内出现和消长。 自从美国Cetus企业Mullis博士在1983年发明聚合酶链反应（PCR）这种核酸扩增技术以来，因为其极高检测灵敏度和特异性，所以在临床感染性疾病、遗传病、肿瘤等诊疗和疗效观察上得到了广泛应用，在器官移植基因配型上也是难以替换技术。其应用大大提升了上述疾病诊疗正确性和快速性。但临床PCR检验必需按规范要求进行，并有严格试验室质量管理，不然，因其极高检测灵敏度，试验室稍有以前扩增产物污染，或在标本核酸提取过程中标本间交叉污染，均可造成假阳性结果出现。同时，也会因为试剂和试验消耗品质量不过关、仪器设备维护校准不到位，或操作不规范等，也很轻易出现假阴性结果。 第一节 临床PCR试验室分区计划设计 怎样计划设计一个合格试验室是每一个临床PCR试验室首先要碰到问题，因为一个试验室一旦经过设计并完成装修，如不符合要求，则会出现很大麻烦，甚至不得不拆了重来。那么怎样才能设计一个合格试验室呢？简单地说，就是十六个字，“各区独立、注意风向、因地制宜、方便工作”。同时要注意临床标本接收问题。 对于临床PCR试验室分区及其设备配置，卫生部颁发《临床基因扩增检验试验室管理暂行措施》（卫医发[]10号）中作了明确要求，而且卫生临床检验中心发出配套文件《临床基因扩增检验试验室工作规范》（卫检字[]8号）又对各区功效及注意事项作了叙述。但具体到某一个试验室，怎样依据其实际情况和环境设计一个符合要求、可确保检测质量及方便工作PCR试验室，试验室技术人员仍时常感到心里没底，所以，本章拟对临床PCR试验室分区计划设计和工作步骤通常标准再作部分具体叙述，并尽可能举出部分实例加以说明。 一、临床标本接收 对于诸如血清（浆）、分泌物、痰液、尿液、脑脊液等临床标本接收、分离血清、编号乃至保留，一个临床PCR试验室到底应在何处进行较为适宜？这是一个很实际问题，也是作为一个临床试验室首先要处理问题，常常有同道提出来。 要回复这个问题，首先让我们来看一下临床标本送到试验室以后我们所要做是什么？通常来说，当临床标本如血液、分泌物和其它体液等送到试验室后，根据临床基因扩增检验质量确保对标本采集、运输和保留要求，对标本接收编号后，即应立即对其分离血清（浆）或预处理后保留待测，而且依据对临床标本较长久保留要求，最好是在分离血清（浆）时，分出两管来，一管用于测定，一管长久保留备查。所以，最好是在PCR试验室四个独立测定区域之外地方接收临床标本，有一台分离血清（浆）用离心机、一台生物安全柜、一台冰箱、加样器及对应一次性经高压处理消耗品如带滤芯吸头、标本接收编号统计本和记号笔等即可。假如不在标本接收区分离血清（浆）标本，只是简单接收，则就不需要分离血清（浆）用离心机、生物安全柜、加样器及其消耗品。 通常，有很多试验室将临床标本接收处放在标本制备区，而一个医院临床标本运输至试验室往往不会在同一个时间，标原来了就应该进行接收登记、交接签字和对标本进行编号，并立即分离血清（浆）或对应处理，所以，如将标本接收处放在标本制备区，就会因为临床标本接收而使试验室工作人员频繁出入标本制备区，从而增加试验室污染机会。而且因为条件所限，有相当一部分临床基因扩增检验试验室设置为一个区套一个区模式，要进入标本制备区就必需优异入试剂准备区，最终还只能经扩增区从产物分析区出试验室。这种情况下就必需将临床标本接收处放在四个区之外地方，能够和其它临床标本接收、编号和保留处放在一起。如在标本接收处对血液标本进行血清（浆）分离，则要注意防污染，所用器具符合要求并在生物安全柜中进行。 所接收用于PCR检验标本应搜集在原始密闭一次性无菌容器中，不能接收从其它检测如生化、免疫检验等分出来标本，因其有较大发生标本间污染可能性。接收临床标本时，操作者应穿工作服及带手套，每份标本应放在合适架子中，预防泄漏，并给出一个唯一性编号。标本保留按要求进行，冰冻通常在－20℃～－70℃条件下，避免反复冻融。在核酸提取时，由PCR试验室人员将标本带入至标本制备区。 临床PCR试验室分区设计通常标准及工作步骤 （一）临床PCR试验室分区设计通常标准 前面说到，要设计一个合格PCR试验室