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用免疫亲和层析柱作为预处理通过LC 摘要 食品安全引人重视，国计民生时刻关注。食品安全无疑是小民生里渗透着的大科学。如何使民众的身体健康与生命安全的得到有效保障?严峻的形势亟待我们建立一种有效的针对食品中存在的有毒有害物质进行提取，纯化并与检测仪器结合使用的高效分析检测方法。这种预处理方法还应该具备简单、便捷、高效和可靠的特点。氯霉素作为一种对人体健康有害的，常被滥用于农水产品的抗生素，有必要施行对它的便捷的预处理，以便后续检测。本实验旨在建立一种单组分的氯霉素的免疫亲和色谱法，用于萃取分离富集虾肉样品的氯霉素残留。将样品用免疫亲和层析柱预处理，再用高效液相色谱-质谱联用检测，在准确可靠的前提条件下，使得样品预处理的操作简单高效化，从而缩短分析时间，达到了简单便捷，高效可靠的目标。 本研究采用的免疫亲和柱，是把Protein G 树脂胶纯化的氯霉素的单克隆抗体，和溴化氰活化Sepharose 4B琼脂糖凝珠共价结合交联，再将此种复合物分装进EP管中制备而成的多个微型小柱。经过实验的验证，实际样品虾肉能够用采用这种方法制备的免疫亲和色谱柱分析：它能将氯霉素从虾肉样品中提取分离，每50L柱胶的最大柱容量为200ng每50L柱胶。在探究上样、淋洗和洗脱的条件后，建立梯度浓度氯霉素标液的S型曲线测定，找到了线性关系、检测限，线性范围内标液的回收率为78.9%-129.9%。之后的实际样品的加标测定结果为：虾肉和奶粉加标量分别为 2ng g?1时，回收率在80%左右，奶粉达到了90%。为保证实验严谨，还进行了空白样品过柱实验作为阴性对照，并用HPLC-MS/MS进行测定无信号证明虾肉基质本身呈阴性。 关键词：样品预处理 免疫亲和层析柱 虾肉检测 氯霉素 高效液相色谱-质谱联用 食品安全 第一章 绪论 1.1 引言 对样品进行分析测试的整个流程大致为：目标样品的收集，样品的分解，样品净化，样品进样前的处理和样品上机测定一共五个流程，并且除了样品的测定外，剩余步骤粗泛而言都属于样品预处理。对于从事分析化学的科研人员来说，我们主要关注样品分解和净化两个环节，这是狭义分析预处理环节[1]。我们的目的就是将待检测的样品处理成满足仪器分析要求的性态，而且在绝大多数情况下要处理成溶液的样品状态。样品预处理是检测与分析工作中的关键环节。从时长来讲，分析过程约60%以上的时间都在样品预处理这一步耗费;从实验本身来讲，样品预处理环节是的分析误差的主要来源。因此，样品的前处理技术是否科学简便，决定着着分析化学技术发展的顺畅与否。 1.2 新型样品前处理技术的评价及发展 1.2.1 样品前处理方法的评价 样品预处理，概括来说是获得样品后将其中的目标组分提取、净化、浓缩、复溶到需要状态的全过程。首要目标是维护仪器安全，避免基质对实验结果造成干扰，提高所用检测方法的选择性、准确度、灵敏度，降低检测限[2]。因此，这些标准也就自然而然的成为对样品前处理方法评价的标准。首先，方法的选择要有针对性，依据样品中残留物质的不同特点而灵活参考。 因此，怎样因材施法，将最适合的方法应用于所分析样品是关键问题。所以我们应该考虑多种因素作为评价预处理方法的标准：是否浓缩了样本，使得方法的灵敏度对应提高、回收率高低、基质干扰，人力物力的耗费、所要求检测条件苛刻与否、是否可以重复实验结果等[3]。所有因素要综合考虑，不能把优势以偏概全，也不能看到缺点就因噎废食。 1.2.2 样品预处理方式及适用条件 数量众多的样品预处理方式各有其原理与适用范围[4]，如表1.1所示。 表1.1样品预处理方式的原理及应用范围 1.2.3 常用预处理方法：固相萃取技术 我们常用SPE代表固相萃取技术，它是现今许多实验室和单位常用的样品处理方法。常常用于纯化生物产品，用于临床医学，生物化学，法医学和药物研究等领域的进一步分析[5]。SPE的普及部分归因于它实现较高的选择性和回收率，易于使用以及对危险萃取溶剂的消耗较少等实用性[6]。它作为一种净化技术常与液相色谱联用，目前这种应用非常普遍[7]。比如环境样品分析、食品样品分析以及药物检测，生物样品分析等[8]。 目前商业上应用比较广泛的预处理耗材就是SPE柱，柱床是一个长约十厘米的塑料小柱，填料根据目标物特性各有不同。使用时先活化洗涤，再将样品溶液稀释一定比例后从柱上口加入，样品溶液通过SPE柱下端流入贮液器中。样品溶液过柱后洗涤吹干，可在柱下端出口处减压抽气，或于柱上口加压。最后用适当溶液洗脱，洗脱液用离心管或试管收集即完成净化[9]。 1.2.4 样品预处理技术的发展 随着科学技术的进步和科研工作者的开发