“重组质粒的转化、提取及酶切分析”综合性实验在医学检验专业分子诊断学教学中的实施精析.docVIP

第 PAGE 页 “重组质粒转化、提取及酶切剖析”综合性实验在医学检验专业分子诊断学教学中实施 　　分子诊断学是分子生物学与检验诊断学结合，是目前医学检验各学科中发展最为迅速学科之一。分子生物学是跨越生物、医学、药学一门学科，掌握分子生物学基础理论与基本技术已成为医学专业学生所必须具备条件，也是其今后学习、工作与科研基础[1-2]。综合性实验能有效地把所学知识联系起来，有助于学生对知识系统理解与掌握，培养学生综合剖析、解决问题能力，为以后从事科研工作打下基础。为此，根据实验改革趋势，结合实验室条件，笔者在医学检验专业分子诊断学教学中实施了“重组质粒转化、提取及酶切剖析”综合性实验，取得了良好教学效果。 　　一、实验设计思路 　　“重组质粒转化、提取及酶切剖析”综合性实验主要包括重组质粒转化、重组质粒提取与DNA限制性内切酶剖析三个部分。先在CaCl2低渗溶液中制备大肠杆菌感受态细胞，将人Bcl-2重组质粒转化DH5α扩增菌，转化后在含氨苄青霉素（Amp）培养基上进行筛选，以获得含重组质粒大肠杆菌，再用碱裂解法分离此大肠杆菌中重组质粒DNA，提取质粒DNA，所制备质粒DNA作为限制性内切酶（RE）EcoRⅠ酶切底物，最后经过酶切、琼脂糖凝胶电泳后，用紫外剖析仪观察重组质粒DNA限制性内切酶图谱。 　　二、实验组织实施 　　“重组质粒转化、提取及酶切剖析”综合性实验所涉及相关内容多、知识面广、实验过程长，并且每一个环节都关系到实验成败，任一环节出现错误，都将导致整个实验失败。为解决这些情况，首先，实验前学生应该查阅相关资料，预习并熟悉整个实验目、原理、器材与试剂、操作步骤与注意事项，记录下预习过程中遇到疑难问题，带着问题听讲，跟着老师思路，边听边思考，避免实验过程中盲目操作；其次，实验教学过程中通过多媒体课件讲解、实验视频播放、教师现场示范，解决同学们预习过程中遇到问题，让同学们充分理解与掌握实验过程中操作要领；再次，学生在实验过程中要严格按照实验指导与试剂盒说明书加入试剂，注意每个步骤反应时间，注意实验注意事项，教师应在旁督促与纠正学生实验过程中错误操作，辅助学生顺利完成实验。最后，教师在实验结束后剖析试验结果，解决学生在实验过程中遇到问题，布置一些富有剖析性问题，启发学生思维，激发学生兴趣。 　　三、实验效果 　　“重组质粒转化、提取及酶切剖析”综合性实验相对于其他分子生物学实验来说，耗时长，使用试剂盒与仪器设备多，由于实验整个过程都是由学生自己独立完成，因此，学生们热情很高、积极参与，认真对待实验每一环节，在实验中给予学生更多独立完成实验机会，调动了学生自主能动性与实验操作积极性，实验效果明显比传统验证性试验效果好。由于“重组质粒转化、提取及酶切剖析”综合性实验涵盖了DNA重组技术、核酸分离与纯化技术、DNA酶切及电泳技术，是一个多方位综合性实验，使学生能够融会贯通多学科知识，全方位、多维度进行思考，极大地提高了学生综合知识运用能力。同时，还培养了同学独立动手能力、相互协作精神、严谨科学态度，达到了综合性实验训练目。 　　四、教学体会 　　1.实验意义。“重组质粒转化、提取及酶切剖析”综合性实验要求学生掌握重组质粒转化技术、质粒提取与纯化技术、限制性内切酶酶切技术与琼脂糖凝胶电泳技术。实验过程中涉及到知识点有：重组质粒DNA性质、转化条件、提取过程中各种试剂作用、限制性内切酶酶切条件与酶切产物琼脂糖凝胶电泳等。学生在教师引导下，将相关联实验内容有机地结合起来，侧重于多方面理论知识与多种操作技能综合运用，极大地调动了学生学习自主能动性，提高了学生剖析问题、解决问题能力。 　　2.存在问题与策略。（1）实验课前学生不预习现象普遍存在，上课时等着教师介绍实验原理、实验试剂与器材、操作步骤与注意事项，之后按照实验课上操作照做，而不是带着问题，思考后操作。课前不预习主要存在以下几种问题：一是不了解实验原理，不明白为什么要这样进行实验；二是实验步骤不明白，常常出现加错试剂、遗弃需要产物、浪费时间、结果不理想等现象；三实验过程中遇到与理论现象不符合情况不知道该如何剖析，常常拿着实验结果问老师对不对，而不善于自己剖析结果。长期下来，造成一些学生对实验课持应付了事态度，实验课积极性不高。针对这些情况，要求学生实验课前预习相关知识，结合所学知识、实验指导书及查阅资料，弄懂实验原理与操作步骤。带着问题去实验，避免机械地照书做。（2）“重组质粒转化、提取及酶切剖析”综合性实验难度大，操作烦琐，包含了大量知识，学生仅靠教师实验课中有限讲解无法完全掌握实验所涉及知识与领会实验操作要领，而学生对知识把握程度直接影响到实验课教学质量。近年来，网络技术与多媒体技术在教学中应用越来越普遍，逐渐成为趋势。针对实验课内容多、操作性强等特点，可以制