核酶与抗体酶.pptxVIP

核酶 抗体酶;核 酶（Ribozyme);1、对酶及生物催化剂的认识的发展;2、长期以来，人们认为只有某些蛋白质才有生物催化功能。但近些年研究发现，某些RNA分子也具有生物催化功能，被称为Ribozyme。1982年Cech等发现四膜虫细胞大核期间26SrRNA前体具有自我剪接功能，并于1986年证明其内含子L-19IVS具有多种催化功能。1984年Altman等发现RNaseP的核酸组分M1RNA具有该酶的活性，而该酶的蛋白质部分C5蛋白并无酶活性。Cech和Altman因发现Ribozyme而获得1989年度诺贝尔化学奖。;3、核酶作用的特点 化学本质 RNA 底物 RNA 肽键 ā-葡聚糖分支酶 反应特异性(专一性）碱基 催化效率 低 产物 ;;二、剪接型核酶;1. I类内含子的自我剪接(Self-splicing);核酶是一种金属依赖酶;2、Ⅱ类内含子的自我剪接;三、剪切型核酶;;;;1、转核苷酸作用 2CpCpCpCpC CpCpCpCpCpC +CpCpCpC 2、水解作用 CpCpCpCpC CpCpCpC + pC 3、转磷酸作用 CpCpCpCpCpCp+UpCpU CpCpCpCpCpC + UpCpUp 4、去磷酸作用 CpCpCpCpCp CpCpCpCpC +Pi 5、限制性内切酶作用 CpUpCpUpN +G CpUpCpU +GpN ;; 五、核酶技术面临的问题;六、脱氧核酶的研究;10-23型脱氧核酶作用机理;手枪型脱氧核酶自我剪切作用机理;;;;;Ⅱ类内含子有一个保守的二级结构： 结构域Ⅰ：两个保守内含子结构序列EBS1,EBS2与两个外显子结构序列IBS1,IBS2互相配对。 结构域Ⅴ：高度保守，催化活性必需。 结构域Ⅵ：A 提供2‘-OH ;5个环和4个螺旋形成两个结构域 剪切反应发生在底物识别序列GUC的5‘端 两个内部环中的碱基及在螺旋区Ⅱ的G11和底物中的G+1都是酶发挥作用所必需的。;HDV RNA斧头结构模式 ; 这类RNA进行自身催化的反应是只切不接。 特点：在 Mg 2+ 或其他二价金属离子存在下，在特定的位点，自我剪切，产生5‘-OH 和2’，3‘-环磷酸二酯末端。;;; 建议的L19 RNA催化机理;;;锤头型核酶的二级结构 和空间立体结构示意图;;CCCUCU O P;CCCUCU O P ;;锤头（Hammerhead)结构;17位（ X ）的核苷酸残基多数是C,不能是U,G. 7位核苷酸残基的置换不会对酶活性产生很大影响 ;发夹（hairpin ）结构;;影响核酶活性的因素;;四、核酶的应用;六、脱氧核酶的研究;10-23型脱氧核酶作用机理;Ⅱ类内含子有一个保守的二级结构： 结构域Ⅰ：两个保守内含子结构序列EBS1,EBS2与两个外显子结构序列IBS1,IBS2互相配对。 结构域Ⅴ：高度保守，催化活性必需。 结构域Ⅵ：A 提供2‘-OH ;5个环和4个螺旋形成两个结构域 剪切反应发生在底物识别序列GUC的5‘端 两个内部环中的碱基及在螺旋区Ⅱ的G11和底物中的G+1都是酶发挥作用所必需的。; 这类RNA进行自身催化的反应是只切不接。 特点：在 Mg 2+ 或其他二价金属离子存在下，在特定的位点，自我剪切，产生5‘-OH 和2’，3‘-环磷酸二酯末端。;;CCCUCU O P;发夹（hairpin ）结构