生物化学与分子生物学：第14章 DNA的生物合成.pptVIP

* 提问：培养至子三代，N14DNA和杂合DNA分子之比是？答：3：1，子四代，7：1 * 大多数生物是双向复制、 枯草杆菌和质粒R6K是不对称双向复制，一个复制叉只复制1/5距离 质粒Col EⅠ是单向复制 * 还有DNApolⅣ、Ⅴ 11 12 * 11 12 * 3? 5? 3? 5? 引物 3 HO 5 SSB Dna C Dna B 引物酶 3 HO 引物酶 5 复制起始完成 拓扑异构酶 二、复制的延长 ? 复制的延长是在DNA-polⅢ催化下以dNTP为原料，以dNMP方式逐个加入到引物或延长中的新链3`-OH末端上，逐个形成3`,5`-磷酸二酯键, 复制方向5`→3`，复制特点：半不连续性复制。图1 图2 DNA复制速度相当快，E.coli 20分钟可繁殖一代，每秒可参入2500个核苷酸。 3? 5? 3? 5? 引物 5 SSB Dna B 引物酶 5 复制延长 拓扑异构酶 5 聚合酶 （动画6） 复制延长过程 5? 5? 5? RNA酶 OH P 5? DNA-pol Ⅰ dNTP 5? 5? P ATP ADP+Pi 5? 5? DNA连接酶 子链上不连续性片段的连接 三、复制的终止 原核生物环状DNA采取单复制子双向复制。领头链和随从链上的RNA引物被RNA酶（或DNA-pol I）水解，空隙由DNA-pol I来催化填补，DNA连接酶将各片段连接成完整的环状新链，形成两个完整的环状DNA。 ori 5` 3` 原核生物复制终止 ter ter ori 3` 3` 5` 5` 5` 3` 3` 5` 3` 5` 5? 3? 3? 5? 5? 3? 3? 5? + 5? 3? 3? 3? 3? 5? 5? 5? （动画7） 细胞周期 DNA合成期 G1 G2 S M 第四节 真核生物的DNA生物合成 细胞周期可分为： S期（Synthetic phase, DNA合成期） G2期（ Gap Ⅱ, DNA合成后期） M期（mitotic phase, 有丝分裂期） G1期（Gap Ⅰ, DNA合成前期） DNA在每个细胞周期只复制一次 1. 真核生物DNA复制是多复制子双向复制，有多个起始点； 2. 复制有时序性，复制子以分组方式激活而不是同步起动； 一、复制的起始 真核生物复制起始与原核生物基本相似，有以下特点： 3. 复制起始点序列较原核oriC短。 酵母复制起始点含11bp的自主复制序列：A(T)TTTATA(G)TTTA(T)。 4. DNA-polα具引物酶活性，DNA-polδ具解螺旋酶活性。 5. 增殖细胞核抗原(PCNA)参与复制起始。其作用与原核DNA- polⅢ的β亚基相似，形成钳卡DNA的夹子 。 二、复制的延长 真核生物复制延长与原核生物基本相似，有以下特点： 1、DNA-polα生成引物（RNA+小段DNA）。 2、DNA-polδ在增殖细胞核抗原PCNA协助下合成DNA子链 。 3、引物和冈崎片段较原核生物短，单个复制子复制速度慢，但总体速度不慢。 3? 5? 5? 3? 前导链 3? 5? 3? 5? 亲代DNA 后随链 引物 核小体 三、真核生物DNA合成后立即组装成核小体 四、端粒酶参与解决染色体末端复制 1、真核生物复制终止 真核生物复制终止与原核生物基本相似。 不同点： DNA为线形，复制结束时两条新生子链的5`端的引物切下后形成的空隙需端粒酶修补并形成端粒。 线性DNA复制的末端 5` 3` 端粒酶RNA 5` 3` 3` OH 5` 3` 逆转录 反折 5` DNA-polε，连接酶 TTTGGGTTTGG-OH 3` AAACCCAAACCCAAACCC TTTGGGTTTGGGTTTGGG-OH3` AAACCCAAACCCAAACCC 端粒酶RNA 2、端粒（telomere） 是真核生物染色体线性DNA分子末端的膨大的粒状结构，由DNA和结合蛋白形成。在维持染色体的稳定性和DNA复制的完整性有重要作用。 ? 端粒DNA序列共同特点是富含T、G短序列的重复序列(Tn G n )x 3、端粒酶(telomerase) 是一种RNA-蛋白质复合物。 端粒酶RNA (An C n )x 端粒酶协同蛋白