绿豆皮对高脂饲料联合链脲佐菌素诱导的糖尿病小鼠糖脂代谢的改善作用.docxVIP

绿豆皮对高脂饲料联合链脲佐菌素诱导的糖尿病小鼠糖脂代谢的改善作用 糖尿病是一种复杂的代谢综合征，其特征是持续的高血糖和异常的脂质代谢绿豆（本研究通过评估绿豆种皮对高脂饲料联合链脲佐菌素诱导的糖尿病小鼠的生理、组织学和生化参数的变化，确定绿豆种皮对糖尿病小鼠糖脂代谢紊乱的改善作用，旨在为绿豆皮健康价值的开发及其在功能食品中的应用提供理论依据。1.材料和方法1.1材料与试剂明绿豆，山西东方物华农业科技有限责任公司。4周龄雄性C57/BL6J小鼠，体重（16±2）g，北京维通利华实验动物技术有限公司。高脂饲料（D12492，60％的能量来自脂肪，提供5.24 kcal/g能量）和低脂饲料（D12450J，10%的能量来自脂肪，提供3.85 kcal/g能量），美国Research Diets公司。链脲佐菌素（STZ），美国sigma公司；无菌生理盐水，上海源叶生物科技有限公司；血糖、总胆固醇（TC）、总甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、血糖、谷草转氨酶（AST）和谷丙转氨酶（ALT）检测标准试剂，北京周天华枫医疗仪器有限公司；胰岛素超敏试剂盒，美国ALPCO公司；糖化血清蛋白（GSP）测定试剂盒，南京建成生物工程研究所。1.2仪器与设备高速多功能食品粉碎机，南京科益机械设备有限公司；超低温冰箱，青岛海尔特种冰柜有限公司；低速离心机，美国Eppendorf公司。电子天平，常熟市双杰测试仪器厂；拜耳血糖试纸及血糖仪，上海健臻医疗科技有限责任公司；血生化仪，日立3100自动血生化仪；酶标仪，美国 Thermo Fisher科技公司。1.3方法1.3.1.绿豆皮的制备及特种饲料加工将绿豆种子于室温下蒸馏水中浸泡8 h，手动揉搓并收集种皮，然后冷冻干燥。使用研磨机将干燥的绿豆种皮研磨成细粉（80目），于-20 ℃条件下保存备用。参照高脂饲料配方，将6%的绿豆皮（水分10.27%，灰分2.1%，脂肪0.6%，蛋白质8.01%，膳食纤维79.03%）以等宏量营养素和等热量的形式配比到高脂饲料中。具体的配比由饲料公司专业技术人员和本单位研究人员结合专业知识，参考相关文献共同商议完成。特种饲料的加工委托常州鼠一鼠二生物科技有限公司完成。1.3.2.模型建立与分组将C57/BL6J小鼠以低脂饲料进行环境适应性喂养1周后，随机选取8只小鼠作对照实验组（NC），继续以低脂饲料饲养。其余小鼠经4周的纯高脂饲料饲养后，经隔夜禁食，注射100 mg/kg的STZ1.3.3.口服葡萄糖耐受实验（OGTT）参考实验室前期的研究方法1.3.4.血生化、胰岛素及糖化血清蛋白的测定小鼠干预实验完成后，隔夜禁食，由专业技术人员对小鼠进行摘眼球取血，收集小鼠血液样品。待血样凝固，3000 r/min 4 ℃离心10 min得小鼠血清样品。采用自动血生化仪对小鼠的空腹血糖、总胆固醇（TC）、总甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）以及谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）进行检测。胰岛素和糖化血清蛋白的测定按照试剂盒说明书操作步骤进行。1.3.5.肝组织的病理切片观察将麻醉处死后的小鼠进行解剖处理，得到的肝和胰腺组织迅速固定在4%的多聚甲醛中，石蜡包埋，稳定后切片，厚度5～7 μm，用苏木精-伊红染色后在显微镜下观察胰腺和肝组织病理形态。1.4数据统计分析试验数据用SPSS 22.0和GraphPad Prism 6.0统计软件分析处理和绘图，采用单因素方差分析及Tukey事后检验，对2组及2组以上的数据进行比较和分析。实验数据以“均值±标准偏差”（2.结果与分析2.1绿豆皮对糖尿病小鼠体重的影响由图1可知，干预实验开始后，持续的高脂饲料饲养使得模型组（DC）小鼠的体重显著高于对照组（NC）。对于干预组（MBC）小鼠，虽然在1～6周与对照组（NC）相比表现出显著的差异，但是在第7周和第8周无显著性差异。整个干预阶段，干预组（MBC）小鼠的体重与模型组（DC）不存在显著性差异，体重增加速度相对缓慢，表明绿豆皮在抑制小鼠体重的增加方面有积极的作用。2.2绿豆皮对糖尿病小鼠空腹血糖、胰岛素和糖化血清蛋白的影响如图2A所示，持续的高脂饲养以及STZ诱导致模型小鼠（DC）的空腹血糖显著高于正常对照组（NC）小鼠。经过8周的干预实验发现，与模型组（DC）小鼠相比，干预组（MBC）小鼠的空腹血糖水平显著降低。STZ注射会导致小鼠胰岛2.3绿豆皮对糖尿病小鼠口服糖耐量的影响如图3A所示，与正常对照组（NC）小鼠相比，模型组（DC）和干预组（MBC）小鼠在给予葡萄糖后血糖浓度