‘聊红’椿组培快繁体系的初步建立.docxVIP

‘聊红’椿组培快繁体系的初步建立 新品种‘聊红’椿是聊城大学课题组在山东聊城发现的一种臭椿(植物组织培养是一种利用植物细胞全能性来进行快速繁殖的技术，应用组织培养技术可在室内实现种苗的周年生产，周期短，繁殖速度快，还能保持植株优良性状，是一种快速繁殖优质种苗行之有效的措施(本研究以新品种‘聊红’椿为研究对象，以单芽(腋芽及顶芽)为外植体，进行组织培养探究，筛选外植体消毒、单芽(腋芽及顶芽)愈伤组织诱导、继代、不定芽分化、生根的最适培养基配方，初步建立组培快繁体系，既能维持亲本性状，促进优质种苗快速生产，又能极大的提高繁殖系数，为‘聊红’椿的工厂化育苗奠定基础，从而实现对新品种‘聊红’椿的快速推广。1结果与分析1.1不同消毒时间对‘聊红’椿外植体污染率和愈伤组织诱导率的影响‘聊红’椿腋芽及顶芽(单芽)作为外植体，用70%酒精浸泡30 s，15%次氯酸钠溶液浸泡15 min之后，再用0.1%氯化汞进行不同时间的灭菌，培养15 d后统计外植体污染率和愈伤组织诱导率(表1)。随着0.1%氯化汞溶液消毒时间的延长，污染率逐渐降低，愈伤组织诱导率先升高后降低。0.1%氯化汞消毒6 min外植体污染率为20.00%，显著低于消毒3 min处理组，愈伤组织诱导率为40.00%，显著高于9、12、15 min处理组。综上，0.1%氯化汞溶液消毒时间为6 min时为‘聊红’椿腋芽及顶芽外植体的最适消毒时间。1.2不同激素配比对愈伤组织诱导、继代的影响将经过最佳消毒处理的‘聊红’椿腋芽及顶芽外植体接种到含有不同植物生长调节剂及浓度配比的初代培养基中，观察其愈伤组织诱导情况，结果如表2所示。不同激素配比对‘聊红’椿腋芽及顶芽外植体具有不同诱导作用。结果如，9种处理中，A2 (0.1 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA, 2,4-D混合液)为最适组合，臭椿腋芽及顶芽单芽愈伤组织诱导率达到40.00%，愈伤组织为黄绿色，生长较好；其次是A4 (0.2 mg/L 6-BA+0.05 mg/L NAA, 2,4-D混合液)，愈伤组织诱导率达到35.71%，愈伤组织为黄绿色，长势一般。15 d后转入继代培养基继续培养两周后发现处理组A2愈伤组织颜色为黄绿色且长势最好(表2)。综上，不同激素配比对愈伤组织诱导、继代的最适激素浓度为0.1 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA、2,4-D混合液。1.3不同激素配比对愈伤组织不定芽分化的影响将继代后的愈伤组织(大约1*1 cm)接种到不同植物生长调节剂及其浓度配比的发芽培养基中，观察不定芽分化情况(表3)。一周后愈伤组织表面有浅绿色芽点冒出，芽点数量不等；15 d左右，芽点长成幼嫩矮小的芽叶。不同激素配比对愈伤组织不定芽分化具有明显差异，结果如表3所示。9种处理中，B7(3.0mg/L 6-BA+0.05mg/L NAA、2,4-D混合液)为最适组合，‘聊红’椿愈伤组织不定芽诱导率达到82.33%，且芽点较多，芽叶长势旺盛；其次是B4(2.0mg/L 6-BA+0.05mg/L NAA、2,4-D混合液)，愈伤组织发芽诱导率达到71.22%，出芽较多，长势较好。综上，B7(3.0mg/L 6-BA+0.05mg/L NAA、2,4-D混合液)为愈伤组织不定芽分化的最适激素配比。1.4不同激素配比对愈伤组织不定芽生根的影响无菌苗长到3~4 cm时，接种到含有不同NAA、IBA激素配比的生根培养基中，观察不定根诱导情况(表4)。接种10 d有较短的白色须状根系在无菌苗底部冒出，无菌苗底部的愈伤组织也由黄绿色变为淡白色。IBA和NAA均对无菌苗生根具有一定的诱导作用，以IBA为生根剂，IBA激素浓度为1.5 mg/L时，无菌苗生根率达到最高40.00%，根部粗短且较硬，生长较好；以NAA为生根剂，NAA激素浓度为2.0 mg/L时，无菌苗生根率达到最高58.33%。根部粗短，生长良好。2.0 mg/L的NAA激素浓度比1.5 mg/L IBA激素浓度生根率高18.33%，综上，2.0 mg/L的NAA激素浓度为本研究的最适生根激素配比。1.5‘聊红’椿腋芽及顶芽(单芽)组织培养流程以‘聊红’椿腋芽及顶芽(单芽)为外植体，接种到初代培养基(MS+0.1 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA, 2,4-D混合液) (图1A)，培养1周后单芽诱导出愈伤组织(图1B)。继代培养2周后愈伤组织继续生长，长势较好(图1C)。转接至发芽培养基(MS+3.0 mg/L 6-BA+0.05 mg/L NAA, 2,4-D混合液)培养10 d，愈伤组织诱导出绿色芽点，数量不等(图1D)。继续培养2周，可见丛生芽出现(图1E)。2周后转入生根培养基(1/2 MS+1