_第六章 组 第2课时 植物细胞杂交 课件 高中生物竞赛.pptxVIP

第6章 植物细胞融合与细胞重组;植物体细胞杂交;1）对称融合 （symmetric fusion）两个完整的细胞原生质体融合。融合子中包含有两个融合亲本的全套染色体和全部的细胞质。 2) 非对称融合（asymmetric fusion）利用物理或化学方法使某亲本细胞核或细胞质失活后进行融合。 A 细胞核+细胞质 B 完整细胞+细胞质 C 完整细胞+细胞质和部分核物质;早期：主要集中在茄科植物中—烟草属、曼陀罗属、矮牵牛属、茄属、蕃茄属和颠茄属等。 ;1960年， cocking首次用酶解法从蕃茄根中大量分离原生质体获得成功;１）原???质体的制备 ２）原生质体融合的诱导 ３）杂种细胞的筛选和培养 ４）杂种植株的再生和鉴定;1）细胞融合效率：细胞融合指数（fusion index, FI）;２）原生质体融合的诱导;（a）生物法 病毒诱导细胞融合主要是由于病毒会与宿主细胞膜直接融合，同时进入两个细胞就会打破两个细胞膜的隔阂，引发细胞质的交流，达到细胞融合的目的。;（b）化学法：采用化学诱导剂促使细胞融合。 ＮａＮＯ３融合法 （异核体形成的频率不高） 　　 高ｐＨ，高Ｃａ２＋法 （高ｐＨ对原生质体的毒害） 　　 聚二乙醇（ＰＥＧ）法 （最广泛被采纳）;优点： 融合成本低，无需特殊设备，融合产生的杂种细胞率较高;（c）物理法：电融合法,利用电场来诱导细胞彼此连接成串，再施加瞬间强脉冲促使质膜发生可逆性点击穿，促进细胞融合的技术。;优点： 1）毒性较小，只要选择的电场参数合适，原生质体在融合后仍能保持较高 的活力 2）融合效率高、重复性好 3）融合速度快 4）免去了化学诱导融合后的洗涤过程，诱导过程可控性强;3) 融合细胞的筛选;融合细胞筛选有两大类方法： （1）根据遗传和生理生化特性的互补选择法 （2）根据可见标记性状的机械选择法;（5） 荧光标记法 用不同的荧光燃料分别标记两个亲本细胞，这样融合细胞内存在两种荧光标记，可用荧光显微镜挑选分离或用流式细胞仪分离。; 4) 融合产物的细胞学观察 （1）有丝分裂 膜融合后，2个细胞的细胞质完全融合，形成双核异核体。有的两个核同步分裂，但他们的染色体不受一个共同的纺锤体所制约。如果在此之后，接着发生胞质分裂， 双核异核体可能在若干细胞世代中继续产生双核子细胞。 核的融合：发生在间期或是第一次同步有丝分裂期 杂种细胞不能继续分裂-- 继续分裂，进一步发育;（2）染色体融合 染色体消减和??色体异常 双亲的染色体往往不能完全混合 双亲之一的染色体会逐渐消除 A 植物中，烟草细胞系中染色体选择性消除的现象：一个月后，杂种细胞 系中很少见到粉蓝烟草的大染色体。7个月后完全消失 B 拟南芥x油菜 （消失） 在这些组合中，多数都是一个亲本的原生质体来自活跃 染色体消减主要是由于不同纺锤体的形成和作用不同步引起的。 染色体异常包括：环状染色体、长染色体、多缢痕染色体、染色体片断 和染色体桥等，他们多是由于不正常配对造成的。;体细胞杂交技术在农业上的应用;体细胞杂交研究的局限性;（五）细胞融合在基础理论方面的应用 （1）基因定位研究 指某一特定基因在染色体上的位置被确定的过程。 融合细胞在传代过程中，亲本染色体有选择性丢失现象。 筛选不同种属融合细胞，只含有亲本一方某条特定染色体或染色体片段的不同细胞克隆。 根据这一细胞克隆是否出现染色体亲本的特征表型，以及该表型与这一染色体或染色体片段是否同时出现，就可确定某种性状的基因是否定位在-- ;（3）分化功能的表达调控研究 将不同分化状态的细胞或不同组织类型的细胞构建成为可存活的种内或种间杂种细胞。然后对构成杂种细胞的两个亲本细胞的基因组和细胞质的彼此互相作用机理进行研究。 该技术已经成为真核细胞基因表达与细胞分化机制研究的有效手段之一。