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大青叶中靛玉红的超临界萃取工艺及含量测定 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：大青叶中靛玉红的超临界萃取工艺及含量测定 1 1材料和方法 2 文2：大乌泡叶中总黄酮含量测定 5 1 仪器与试药 6 2 方法与结果 7 3 讨论 9 参考文摘引言： 9 原创性声明（模板） 10 文章致谢（模板） 11 正文 大青叶中靛玉红的超临界萃取工艺及含量测定 文1：大青叶中靛玉红的超临界萃取工艺及含量测定 0引言 靛玉红主要来源于植物马蓝(Baphicacanthus cusia)、蓼蓝(Polygonum tinctorium)及菘蓝(Isatis indigotica)的中药材如大青叶、板蓝根、青黛等，靛玉红是其主要有效成分. 靛玉红有 治疗 慢性髓性白血病作用，是一种应用前景广阔的抗肿瘤成分［1］ 靛玉红在中药材中含量很低，为减少药物使用量，提高生物利用度，我们用超临界流体萃取（SFE）法对大青叶中的靛玉红进行分离提纯，同时建立萃取物中靛玉红含量的HPLC测定方法，优化靛玉红SFE工艺. 1材料和方法 材料Golden System高效液相色谱仪（美国Beckman公司），配125型高压双泵，168型二极管阵列检测器；色谱柱: Synei FusionRP柱（ mm×250 mm， 4 μm，美国Phenomenex公司）；FY超临界萃取仪（南通市飞宇石油科技开发有限公司）；R200D 电子 分析天平（德国Satorius公司）；旋转蒸发仪（EYELA ASPIRATOR A3S RIKAKIKAT ）. 大青叶购自西安药材市场，按照 中国 药典（2005年版）有关大青叶项下鉴定本品为合格药材；靛玉红对照品购自中国药品生物制品检定所，批号；甲醇为HPLC级（美国FISHER公司），水为超纯水，其余试剂均为AR级. 方法 正交实验设计采用L9(34)设计，选择萃取温度、萃取压力、分离温度及分离压力四个因素，每个因素取3水平. 分别为萃取温度40, 50及60℃；萃取压力20, 30及40 MPa；分离温度30, 40及50℃；分离压力8, 10及12 MPa. 供试品溶液的制备打开超临界萃取仪，按的设计设置萃取仪温度参数，预热完毕后将精密称取的大青叶50 g放入萃取缸Ⅱ，按的设计将压力值调整到需要的参数，同时向副泵系统下的夹带剂缸中加入氯仿100 mL，开动副泵，开始萃取. 每半小时收集一次分离液，至2 h内连续收集不到液体时停止该次实验. 将收集到的分离液在旋转蒸发仪上蒸干，用甲醇定容于10 mL容量瓶中，作为供试品溶液. 色谱条件以甲醇 mol/L醋酸铵（72∶28）（用醋酸以1∶150的比例调节pH值）为流动相；流速为 mL/min；检测器灵敏度： AUFS；柱温20℃；检测波长289 nm. 理论板数按靛玉红峰 计算 不低于4000. 对照品及样品色谱图不同(图1,2) 图1靛玉红对照品的色谱图（略） 图2样品色谱图（略） 线性考察精密称取靛玉红对照品10 mg，用甲醇定容于50 mL容量瓶中，超声5 min，制成 g/L的对照品溶液，分别精密吸取该对照品溶液3, 2, 1, 及 mL于5 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度. 各取以上5个对照品溶液20 μL进样于HPLC系统中，以色谱峰面积对靛玉红进样浓度作线性回归，得回归方程Y=+, r=. 靛玉红在8~120 mg/L内，线性关系良好. 精密度测定取线性关系中同一对照品液连续进样5次，每次20 μL，靛玉红峰面积D为% 稳定性实验将同一供试品液在0, 1, 2, 4, 12 h各进样一次测试峰面积，结果D为%，表明样品溶液在12 h内稳定. 重复性实验取同一供试品液5份，依法测定，结果靛玉红平均含量为 μg/g，D为% 加样回收率实验精密量取已知含量的同一供试品液3份，每份1 mL，分别精密加入 mL浓度为 g/L的对照品溶液，按样品含量测定方法操作，平均回收率为%, D为% 样品测定精密吸取上述正交实验提取的供试品溶液各20 μL进样,按色谱条件进行测定. 2结果 外标法 计算 靛玉红含量（表1），并计算每个因素每水平的靛玉红含量（表2） 表1不同工艺的靛玉红含量（略） 表2每个因素每水平的靛玉红含量（略） K值为每因素每水平的三个值之和，如K1为每因素水平为1时的三个值的和，余同. R为级差，即K1, K2和K3三个值中最大值与最小值之差. 对实验数据进行方差分析，结果萃取温度、萃取压力及分离压力对靛玉红的回收率均有显著影响（P）. 将级差R值依大小排列，则影响靛玉红含量的四因素主次顺序为萃取温度萃取压力分离压力分离温度. 以每个因素每水平的K值中的最大值得知：最佳工