灵芝多糖肽对Alzheimer样大鼠海马超微结构和抗氧化能力的影响.docVIP

灵芝多糖肽对Alzheimer样大鼠海马超微结构和抗氧化能力的影响 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：灵芝多糖肽对Alzheimer样大鼠海马超微结构和抗氧化能力的影响 1 1 材料与方法 2 2 结 果 4 3 讨 论 5 文2：穴位埋线对拟阿尔茨海默病大鼠海马超微结构和胶质纤维酸性蛋白的影响 6 1 材料与方法 6 2 结果 8 3 讨论 9 参考文摘引言： 10 原创性声明（模板） 11 文章致谢（模板） 12 正文 灵芝多糖肽对Alzheimer样大鼠海马超微结构和抗氧化能力的影响 文1：灵芝多糖肽对Alzheimer样大鼠海马超微结构和抗氧化能力的影响 阿尔茨海默病(Alzheimer Disease，AD)是一多发于老年的中枢神经系统退行性疾病，以进行性记忆减退、认知功能障碍、易激惹及睡眠障碍等为主要临床症状，病理特征主要有老年斑、神经纤维缠结、神经元死亡等，其病因及发病机制尚不清楚〔1〕，其中氧化应激在AD发病过程中起重要作用〔2〕。有研究发现，自由基参与了老年斑、神经纤维缠结、神经元死亡等特征性的病理损害〔3〕，并可引发膜脂质过氧化反应并生成丙二醛(MDA),MDA的产生量与脂质过氧化反应相平行〔4〕;而超氧化物歧化酶(SOD)是机体重要的抗氧化酶,具有清除氧自由基,保护细胞免受损伤的作用。灵芝是我国传统的延年益寿中药,具有“益精气、扶正固本”的作用。灵芝多糖、灵芝多肽是其主要有效成分,以往研究表明,灵芝多糖具有清除体内自由基、抗氧化等作用〔5，6〕。本研究通过观察灵芝多糖肽(GLPP)对Alzheimer样大鼠海马超微结构、海马组织SOD 活性和MDA 含量以及空间学习记忆能力等的影响，探讨GLPP对AD的 治疗 作用及机制。 1 材料与方法 动物 雄性Wistar大鼠60只,清洁级,体重180～220 g,由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供。 方法 试剂与药品 GLPP购自南通四海植物精华有限公司，系从泰山赤灵芝中得到的总糖肽，其中多糖占50%，多肽占6%，溶于加热的生理盐水，配制成%的溶液，无菌过滤备用。SOD和MDA检测试剂盒购自南京聚力生物医学工程研究所。 模型制备 大鼠随机分为对照组、模型组、组、GLPP组，每组15只。除对照组(正常昼夜节律)外，其余各组每天连续光照(光照度400 Lux)24 h，共30 d。其间GLPP组每天一次GLPP 250 mg/kg灌胃;组用相同体积的生理盐水灌胃;模型组只进行连续光照，不作其他处理。实验期间给予大鼠自由摄食与饮水。 检测指标 大鼠空间记忆能力的测定 采用Morris水迷宫系统测试大鼠的空间记忆能力。Morris水迷宫实验系统由水迷宫装置、水迷宫图像自动采集和处理分析系统组成。水迷宫池分为四个象限(通常以与平台所在象限相对的象限为第一象限,实验中取第一象限的潜伏期为记录成绩),训练时大鼠从任何一象限入水,面向池壁轻放于水中,记录入水时间及潜伏期(即大鼠从入水到找到平台后四肢爬上平台时所需的时间)。每只大鼠每天在4个象限学习4次,每次游泳时限为60 s,即在60 s内未找到平台者潜伏期记为60 s，休息30～ 60 s后再进行下一次训练。本研究所采取的策略是第31 天采用Morris水迷宫训练7 d,以第7天的潜伏期成绩反映大鼠的空间记忆能力。 大鼠海马SOD活性与MDA含量检测 水迷宫训练7 d后,处死大鼠,冰台上快速分离大鼠海马组织，加入冰生理盐水,冰浴下超声波破碎制成10%(w/v)匀浆,离心10 000 min,10 min,取上清液用于SOD活性和MDA含量的检测，严格按照试剂盒说明书进行。 电镜标本的制作及大鼠海马超微结构的观察 Morris水迷宫测试完毕(第37天)后，每组随机提取2只大鼠用6%水合氯醛麻醉后，迅速切开胸腔，将灌注针头从大鼠心脏心尖部刺入从左心室至左心房，同时立即切开心脏右心耳，先用生理盐水(4℃预冷)300 ml灌注冲洗，随后用4%多聚甲醛+%戊二醛400ml(4℃预冷)灌注，以动物尸体展开，肢体展开变硬为标准。灌注结束即迅速断头，在冰盘上取出脑组织，剥离左侧海马，取中段组织块放入3%戊二醛中4℃冷藏。海马电镜标本制作及观察：将海马用冲洗液(PBS)反复清洗，冲洗完毕，将海马组织进行后固定，即用1%锇酸固定1～2 h。制样时再切取海马组织块约1 mm3，经漂洗液充分洗涤后进行脱水：50%、70%、90%乙醇各10～15 min，90%乙醇+90%丙酮(1∶1)10～15 min，90%、 100%丙酮10～15 min。以上步骤均在4℃进行，100%丙酮10～15 min在室温进行。SPURR包埋剂包