《发酵工程原理》课件第三章1 培养基及设备的灭菌 生产菌种的扩大培养.pptVIP

* 所谓菌丝粘壁是在种子培养过程中，菌丝正常发育生长，但再继续培养时菌丝逐步黏附在罐壁上。当菌丝繁殖的速度低于被罐壁黏附的速度时，培养液中菌丝浓度越来越小，最后就可能形成菌丝团。菌丝粘壁的原因是搅拌效果不好．搅拌时泡沫过多，以及种子罐的装料系数过小等。在以真菌为产生菌的种子培养过程中，发生菌丝粘壁的机会较多。 * 3，种龄 种龄：是指种子罐中培养的菌丝体开始移入下一级种子罐或发酵罐时的培养时间。 通常种龄是以处于生命力极旺盛的对数生长期、菌体量还未达到最大值时的培养时间较为合适。 时间太长，菌种趋于老化，生产能力下降，菌体自溶；种龄太短，造成发酵前期生长缓慢。 * 4，接种量 采用较大的接种量可以缩短发酵罐中菌丝繁殖达到高峰的时间，使产物的形成提前到来，并可减少杂菌的生长机会。 但接种量过大或者过小，均会影响发酵。过大会引起溶氧不足，影响产物合成；而且会过多移入代谢废物，也不经济；过小会延长培养时间，降低发酵罐的生产率。 通常接种量，细菌1~5%，酵母菌5~10%，霉菌7~15%，有时20~25% * 三、种子质量的控制措施 种子质量的最终指标是考察其在发酵罐中所表现出来的生产能力。 因此首先必须保证生产菌种的稳定性，其次是提供种子培养的适宜环境保证无杂菌侵入，以获得优良种子。 菌种稳定性的检查 无（杂菌）检查 * 四、种子质量标准 1，细胞或菌体 菌丝形态、菌丝浓度和培养液外观（色素、颗粒等） 单细胞：菌体健壮、菌形一致、均匀整齐，有的还要求有一定的排列或形态； 霉菌、放线菌：菌丝粗壮、对某些染料着色力强、生长旺盛、菌丝分枝情况和内含物情况好。 * 2，生化指标 种子液的糖、氮、磷的含量和pH变化。 * 3，产物生成量 在抗生素发酵中，产物生成量是考察种子质量的重要指标，因为种子液中产物生成量的多少间接反映种子的生产能力和成熟程度。 * 4，酶活力 种子液中某种酶的活力，与目的产物的产量有一定的关联。 * 五、种子异常分析 菌种生长速度，过快或过慢(培养基) 菌丝结团(溶氧) 菌丝粘壁(搅拌) * 第三节 实例 谷氨酸发酵的菌种扩大培养 斜面菌种→一级种子培养→二级种子培养→发酵罐 1，斜面菌种的培养 菌种的斜面培养必须有利于菌种生长而不产酸，并要求斜面菌种绝对纯，不得混有任何杂菌和噬菌体，培养条件应有利于菌种繁殖，培养基以多含有机氮而不含或少含糖为原则。 (1) 斜面培养基组成 葡萄糖 0.1％ 蛋白陈 1.0％ 牛肉膏 1.0％ 氯化钠 0.5％ 琼脂 2.0~2.5％ PH 7.0~7.2 （传代和保藏斜面不加葡萄糖） (2) 培养条件：33~34℃，培养18~24h * 2， 一级种子培养 一级种子培养的目的在于大量繁殖活力强的菌体，培养基组成应以少含糖分，多含有机氮为主，培养条件从有利于长菌考虑。 (1) 培养基组成 葡萄糖 2.5％ 尿素 0.5％ 硫酸镁 0.04％ 磷酸氢二钾 0.1％ 玉米浆 2.5~3.5％(按质增减) 硫酸亚铁、硫酸锰 各2ppm pH 7.0 * (2) 培养条件 用1000mL三角瓶装入培养基200mL，灭菌后置于往复式摇床上振荡培养12h，培养温度33~34℃ (3) 一级种子质量要求 种龄：12h pH值：6.4± 0.1 光密度：净增OD值0.5以上 残糖：0.5％以下 无菌检查：(-) 噬菌体检查： (-) 镜检：菌体生长均匀、粗壮，排列整齐 革兰氏阳性反应。 * 3， 二级种子培养 为了获得发酵所需要的足够数量的菌体，在一级种子培养的基础上进而扩大到种子罐的二级种子培养。种子罐容积大小取决于发酵罐大小和种量比例。 (1) 培养基组成 * (2)培养条件 接种量：0.8~1.0％ 培养温度：32~34℃ 培养时间：7~8h 通风量 50L种子罐1:0.5 搅拌转速340r／min； 250L种子罐1:0.3 搅拌转速300r／ min 500L种子罐1:0.25 搅拌转速230r／ min * (3)二级种子的质量要求 种龄 7~8h pH 7.2左右 OD值 净增0.5左右 无菌检查 (-) 噬菌体检查(-) * 第三节 生产发酵罐的无菌接种 生产规模发酵罐的接种，包括两个方面： 从实验室摇瓶或孢子悬浮液容器中移种入一个种子罐， 从一个种子罐移入另一个生产发酵罐中。 * 从实验室摇瓶或孢子悬浮液容器接种 * 从种子罐接种 * 第四节 菌种的保藏与复壮 一、菌种保藏的意义 菌种是从事微生物学以及生命科学研究的基本材料，特别是利用微生物进行有关生产如抗生素、氨基酸、酿造等工业，更离不开菌种。 所以