2型糖尿病患者视网膜病变与维生素D受体基因多态性的关系研究.docVIP

2型糖尿病患者视网膜病变与维生素D受体基因多态性的关系研究 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：2型糖尿病患者视网膜病变与维生素D受体基因多态性的关系研究 1 1、对象和方法 2 2、结果 4 3、讨论 5 文2：2型糖尿病患者视网膜病变与肾脏损害的相关性 7 1 材料和方法 8 2 结果 10 3 讨论 11 参考文摘引言： 13 原创性声明（模板） 15 文章致谢（模板） 15 正文 2型糖尿病患者视网膜病变与维生素D受体基因多态性的关系研究 文1：2型糖尿病患者视网膜病变与维生素D受体基因多态性的关系研究 引言 糖尿病性视网膜病变(diabetic retinopathy，DR)是临床最常见的糖尿病微血管并发症，DR是成人致盲的重要原因，据相关报道，超过一半的2型糖尿病(type 2diabetes mellitus，T2DM)患者会患视网膜病变，其中近1/3的患者会因DR而失明[1]。可见，DR严重威胁T2DM患者的生活质量，同时给患者家庭和社会带来沉重的负担。2型糖尿病视网膜病变的具体发病机制仍未阐明，目前维生素D与T2DR的相关性是国内外研究的热点[2]。维生素D是一组内分泌激素，在肝脏及肾脏内羟化成为活性1，25-二羟基维生素D3[1，25(OH)2D3]，具有抗氧化、抑制血管平滑肌增生以及抗血管增殖的作用，在视网膜组织中广泛表达[3]。维生素D与维生素D受体(VDR)结合，通过激活及调节多条细胞通路来发挥其生物学作用[4]。近年来，出现少数关于VDR基因多态性与DR相关性的相关报道，但结果差异较大甚至截然相反。因此，本研究通过多重高温连接酶检测反应(improved multiple ligase detection reaction，iMLDR)技术进行单核苷酸多态性(singlenucleotide polymorphism，SNP)分型，检测并分析DR患者、的VDR SNPs位点基因多态性，旨在探讨VDR基因多态性与DR的相关性，为DR的临床预防及个性化治疗提供理论依据，现报道如下。 1、对象和方法 对象 筛选2018-02/2019-01我院收治的T2DM患者作为研究对象。纳入标准:(1)符合《中国2型糖尿病防治指南(2017版)》[5]相关诊断标准;(2)同意取血样行DNA检测;(3)个人资料完整;(4)患者自愿参与本研究，并签署知情同意书。排除标准:(1)合并其他恶性肿瘤;(2)与已纳入对象有血缘关系;(3)肾功能衰退;(4)急性或者慢性炎症者;(5)其他原因导致的视网膜病变。最终纳入研究的T2DM患者共198例。本研究遵循《世界医学协会赫尔辛基宣言》，并经我院伦理委员会批准。 方法 采用免散瞳数码眼底成像方法对198例患者进行眼底检查。患者先在暗室内适应视觉，后由眼科医师使用佳能EOS 40D免散瞳数码眼底相机获取45°后极部视网膜彩色图像。由眼科医师根据美国眼科协会出台的2018年糖尿病视网膜病变临床指南[6]阅片诊断，并将198例患者分为DR组(n=108)和非DR组(n=90) .1相关指标检测 使用EDTA管取患者入院次日清晨空腹静脉血约5mL，提取DNA，-80℃储存备用。检测空腹血糖(FBG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、甘油三酯(TG)、糖化血红蛋白(HbA1c)和血管内皮生长因子(VEGF) .2 PCR扩增 主要试剂:Taq DNA聚合酶(赛默飞世尔科技有限公司，中国)，引物(上海生工生物工程公司)，PCR反应缓冲液(TaKaRa公司)，PCR Marker(南京赛泓瑞生物科技有限公司)，琼脂糖(上海源叶生物科技有限公司)等。PCR条件:反应体系10μL包括1×HotStarTap缓冲液、/L dNTP、/L Mg2+ 、1U HotStarTap聚合酶、1μL DNA样本及1μL多重PCR引物，引物序列见表1。反应热循环:95℃预变120s;94℃ 20s、65℃ 40s、72℃ 90s，循环11次;94℃ 20s、59℃ 30s、72℃ 90s，循环24次;72℃延伸120s，4℃保存。 .3 PCR产物纯化 5U SAP酶、2U Exonuclease Ⅰ酶加入10μL PCR产物中，温浴(37℃，60min)，然后灭活(75℃，15min)。连接引物反应体系:10×连接缓冲液(μL)、μL高温连接酶、μL 5连接引物混合液(μmol/L)，μL 3连接引物混合液(μmol/L)、μL纯化后多重PCR产物、μL ddH2O，混匀。将稀释后的连接产物(μL)、Liz 500SIZSTANDARD(μL)、hi-Di(μL)混匀