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Hcy水平与颈动脉硬化的相关性和对MCP1表达的影响分析 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：Hcy水平与颈动脉硬化的相关性和对MCP1表达的影响分析 1 1、材料与方法 2 2、结果 4 3、讨论 5 文2：经颅多普勒对脑动脉硬化的检测与分析 6 1 资料与方法 6 2 结果 7 260例受检患者中，频谱脉动参数增高率为100% 7 3 讨论 8 参考文摘引言： 8 原创性声明（模板） 10 文章致谢（模板） 11 正文 Hcy水平与颈动脉硬化的相关性和对MCP1表达的影响分析 文1：Hcy水平与颈动脉硬化的相关性和对MCP1表达的影响分析 动脉粥样硬化(AS)是心脑血管的重要危险因素之一，早发现、早诊断、早期干预显得尤为重要。同型半胱氨酸(Hcy)是蛋氨酸的中间代谢产物，在体内主要通过甲基化途径和转硫途径代谢，研究发现高Hcy血症与颈动脉内-中膜厚度(IMT)和颈动脉狭窄呈正相关，是颈动脉硬化的独立危险因素之一[1]。颈动脉因位置表浅、检测方便无创被作为动脉硬化评估的指标。Hcy与AS的机制复杂，可能与氧化应激、内皮细胞功能障碍、细胞炎性因子等导致内皮细胞增殖有关[2]。单核细胞趋化蛋白(MCP)-1是促炎性因子，促进单核-巨噬细胞的迁移和组织浸润，参与动脉硬化的形成和发展。本研究分析Hcy和颈AS的关系，同时通过体外培养人脐静脉内皮细胞，检测MCP-1的含量，探讨Hcy引起动脉硬化的机制。 1、材料与方法 研究对象与方法 纳入2016～2017年安徽省直医院住院的226例缺血性脑卒中患者，根据颈动脉超声检查结果分为颈动脉内膜正常组(91例)，内膜增厚组(24例)，斑块组(100例)和狭窄组(11例)。纳入标准:①年龄60～90周岁;②入院后完善血生化检查和颈动脉彩超检查;③无颈动脉支架或内膜剥脱术史;④病例资料完整。排除标准:①近期使用影响Hcy的药物如B族维生素，甲氨蝶呤等;②甲状腺功能异常;③肝肾功能异常;④认知障碍、不能配合检查者。细胞培养实验:原代培养的人脐静脉内皮细胞，p38抗体、磷酸化p38抗体购自美国SantacruzBiotechnology公司，MCP-1抗体购自美国Sigma公司。 主要仪器 全自动生化分析仪，电泳仪DYY-10(Ecp3000北京六一仪器厂)，TGL-18R冷冻离心机(珠海黑马仪器厂) 水平测定 所有患者空腹12h以上，晨起用生化管抽取静脉血5ml，迅速离心后使用全自动生化仪测量血糖、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、血尿酸(UA)、Hcy水平等指标。 颈动脉超声 采用PhilipsEpiq7C彩色多普勒超声诊断仪，被检查者平卧，检测颈总动脉、颈动脉分叉处、颈内动脉，IMT，并观察有无斑块形成，狭窄程度及斑块性质。选取双侧颈总动脉远端及颈内动脉分叉膨大部～血管壁，分别测量动脉前后壁内膜表面间垂直距离及管腔内膜界面为IMT，，斑块凸向管腔为斑块形成，颈动脉斑块导致管腔狭窄50%为颈动脉狭窄。 人脐静脉内皮细胞培养 培养基中加入不同浓度Hcy(0、1、10、100、1000μmol/L)，另将培养基分为对照组，Hcy组和Hcy+SB203580(p38通路特异性抑制剂)，实时定量聚合酶链反应(PCR)测定人血管内皮细胞MCP-1mRNA水平，PCR产物(MCP-1290bp，GAPDH454bp)在%的琼脂糖凝胶电泳。MCP-1上游GCTGACCCCAAGAAGGAATG、下游TGAGGTGGTTGTGGAAAAGG、GAPDH上游CGTCCCGTAGACAAAATGGT、下游TTGATGGCAACAATCTCCAC。MCP-1和GAPDH的吸光度比值为mRNA的相对表达量。 实时定量PCR检测 提取人静脉内皮细胞RNA，按照试剂盒操作步骤转录为cDNA，使用SYbrGreen燃料在实时定量PCR仪上进行上机检测。 印迹检测 放射免疫沉淀(RIPA)缓冲液提取人静脉内皮细胞总蛋白，二喹啉甲酸(BCA)法测定总蛋白浓度，质量相等的蛋白提取物经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS)后转移到硝化纤维素膜上进行蛋白印迹分析，以GAPDH作为内参。 统计学处理 采用软件进行单因素方差分析、χ2检验及Logistic回归分析。 2、结果 各组一般资料比较 各组年龄、性别、高血压者比例、糖尿病者比例、体重指数(BMI)、TC、TG、LDL-C和血UA水平差异均无统计学意义(均P);狭窄组HDL-C水平与内膜正常组差异有统计学意义;与内膜正常组相比，内膜增厚组、斑块组及狭窄组Hcy水平明显升高(P)，随着IMT增