第十一章抗生素类药物的分析.ppt

庆大霉素C组分的测定实验条件的讨论 1、OPA的作用是什么？ 2、冰醋酸的作用是什么？ 3、庚烷磺酸钠的作用是什么？ 第三十一页，共七十四页。 （四）硫酸盐测定 剩余滴定法 空白滴定 第三十二页，共七十四页。 四、含量测定 1.免疫分析法 2.微生物检定法（各国药典普遍采用） 利用抗生素在琼脂培养基内的扩散作用量反应平行线原理的设计，比较标准品与供试品两者对接种的试验菌产生抑菌圈的大小，以测定供试品效价的一种方法。 第三十三页，共七十四页。 3.HPLC法 优点: 高灵敏度、专属性 广泛应用于抗生素稳定性研究及体内分析 氨基糖苷类一般无吸收 柱前(后)衍生化 【含量测定】 Ch.P规定方法 微生物检定法 盐酸大观霉素，硫酸新霉素，硫酸链霉素， 硫酸核糖霉素，硫酸奈替米星，硫酸阿米卡星，硫酸庆大霉素，硫酸西索米星，硫酸巴龙霉素， 硫酸小诺霉素 HPLC 法 硫酸依替米星，硫酸卡那霉素 第三十四页，共七十四页。 生物样品中氨基糖苷类分析的原则 1、OPA、FMOC-Cl、FDNB柱前衍生化反应 重要意义： 2、样品预处理： （1）离子对试剂 （2）固相萃取柱 3、柱前衍生化反应是否完全需要考查 第三十五页，共七十四页。 第四节 四环素类抗生素 结构上具有氢化骈四苯环，统称为四环素族抗生素 一、基本结构与化学性质 化学结构: 四骈苯或萘骈萘的衍生物。取代基不同而构成不同的四环素. name R R’ R’’ R’’’ 四环素 TC H OH CH3 H 金霉素 CTC Cl OH CH3 H 土霉素 OTC H OH CH3 OH 脱氧土霉素 DOTC H H CH3 OH 第三十六页，共七十四页。 多西环素 （DOTC）（doxycycline） （脱氧土霉素） （强力霉素） 第三十七页，共七十四页。 A环 B环 C环 D环 二甲氨基—N(CH3)2 酚羟基 酰胺基—CONH2 酮基与烯醇基共轭双键系统 酮基与烯醇基共轭双键系统 第三十八页，共七十四页。 ★结构特点与分析方法之间的关系 1.共轭双键，刚性结构：具有紫外吸收，可产生荧光，可进行鉴别和含量测定。 2．具有酚羟基、烯醇基：可发生三氯化铁反应、可与金属离子络合，用于鉴别。 3.具有手性碳原子：具旋光性，用于鉴别。 第三十九页，共七十四页。 理化性质 1.酸碱性与溶解度 两性: 酚羟基、烯醇羟基 弱酸性 二甲胺基 弱碱性 1.与酸、碱均能成盐 2.强酸或强碱中溶解度↑ 3.游离组分在水中溶解度很小 溶解度: 第四十页，共七十四页。 2、含结晶水 四环素：6个结晶水占19.6% 土霉素：2个结晶水占7.5% 加热时可失去结晶水,当含水量 低于19.6%的四环素和低于7.5%的土 霉素,置于空气中要吸收水分 第四十一页，共七十四页。 2.旋光性——用于鉴别、定量分析 ChP —盐酸土霉素：-188°～-200 ° 盐酸四环素：-240°～-258 ° 3.UV吸收和荧光 共轭双键系统：具有紫外吸收，可产生荧光 降解产物的荧光可供鉴别用。 土霉素 绿色荧光； 金霉素 蓝色荧光； 四环素 黄色荧光 H+ OH- 第四十二页，共七十四页。 4.与金属离子形成配位化合物 酚羟基、烯醇基的性质。 Ca2+ Mg2+ Fe3+ Al3+等 pH3 ~ 7.5 强烈荧光 第四十三页，共七十四页。 5.不稳定性: 水溶液对酸、碱、氧化剂均不稳定。 1）差向异构化 淡黄→黑 蓝色荧光 土霉素、多西环素不易差向异构化 第四十四页，共七十四页。 A环上手性C4构型的改变 差向四环素 第四十五页，共七十四页。 （土霉素、多西环素不易差向异构化） 第四十六页，共七十四页。 多西环素不发生 （C环无羟基） 第四十七页，共七十四页。 （2）碱性下降解 （荧光） 多西环素不发生 第四十八页，共七十四页。 ～ ～ TC ETC ATC EATC ＜ ＜ 差向 脱水 差向脱水 第四十九页，共七十四页。 ★二、鉴别试验 1.浓H2SO4反应 2.FeCl3反应 酚-OH反应 氧化、脱水 第五十页，共七十四页。 3.TLC法 正相分