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布鲁氏菌主要外膜蛋白特征及其应用研究进展 王 锐，王占黎，丁海涛，邹 昊(1.内蒙古医科大学，内蒙古 呼和浩特 010010；2.内蒙古自治区疾病相关生物标志物重点实验室；3.内蒙古自治区人民医院检验科)布鲁氏菌属是一种革兰氏阴性、好氧、不运动、无荚膜的杆菌，可引起布鲁氏菌病[1]。布鲁氏菌病是一种人畜共患的慢性传染性疾病，给全球160多个国家和地区带来健康威胁和财务负担[2]，每年全球约有50 000新增病例[3]。在中国，布鲁氏菌病主要发生在北方地区，主要累及人群是青壮年农牧民[4-5]。布鲁氏菌有特殊的细胞膜结构，主要包括脂多糖、外膜蛋白和脂质蛋白等[6]。其主要外膜蛋白(OMP)于1980年代初通过选择性提取技术获得[7]，根据其分子量分为三组，第一组蛋白分子质量在94 kDa，第2组蛋白质量在36～38kDa,同时被称为孔蛋白，第3组蛋白包括分子质量27 kDa ，31～34 kDa和25～27 kDa。外膜蛋白对于维持膜的完整性和选择性渗透至关重要，同时也是布鲁氏菌重要的毒力因子，在布鲁氏菌感染致病过程中起重要作用[8-9]。文献报道，布鲁氏菌的外膜蛋白具有较好的免疫原性，能够刺激机体产生较强的免疫力，可作为布鲁氏菌病诊断性抗原和布鲁氏菌亚单位疫苗的候选物[10]。本文对目前几种重要的布鲁氏菌外膜蛋白相关研究进展进行综述，以期进一步了解布鲁氏菌外膜蛋白的特性，为研制布鲁氏菌病的诊断试剂及相关疫苗提供参考价值。1 OMP28布鲁氏菌外膜蛋白28(OMP28)，也称CP28或BP26，属于第3组外膜蛋白，在流产布鲁氏菌(B.abortus),猪布鲁氏菌(B.suis),绵羊布鲁氏菌(B.ovis),犬布鲁氏菌(B.canis),沙林鼠布鲁氏菌(B.neotomae)和马耳他布鲁氏菌(B.melitensis)中高度保守 ，是布鲁氏菌病的重要诊断抗原[11]。它还可以有效诱导抗体反应，以预防布鲁氏菌感染[12]。另外，OMP28可用于鉴别布鲁氏菌自然感染动物和疫苗免疫接种动物[13]。Verstreate等[14]采用酶联免疫吸附测定(ELISA)和生物膜层干涉(BLI)等方法分析了Bp26蛋白与细胞外基质(ECM)蛋白的相互作用。结果发现，OMP28与I型胶原蛋白和玻连蛋白结合，也可与可溶性纤连蛋白结合，但不与层粘连蛋白结合。该研究还使用抗Bp26小鼠血清筛选Bp26抗原表位，发现5个线性表位，其中位于Bp26 C端的表位肽结合能力最强。这项研究有助于理解布鲁氏菌与宿主靶细胞之间的相互作用，同时也有助于未来诊断、疫苗等的开发研究。Koyuncu等[15]克隆、表达和纯化了布鲁氏菌Omp28的前体Rev1，并基于ELISA技术开发诊断试剂，其灵敏度、特异性、阳性预测值和阴性预测值均较高，有望用于开发人类布鲁氏菌病诊断试剂盒。另外，将重组外膜蛋白28(rOmp28)直接包被微量滴定板，采用间接ELISA进行血清学检测，其灵敏度和特异性表现良好，证实了该重组蛋白质是开发布鲁氏菌病实验室诊断试剂的合适候选蛋白[16]。近十年的研究表明，多组分疫苗比单组分亚单位疫苗能够诱导更多的保护性反应[17]。来自不同布鲁氏菌抗原的表位嵌合蛋白所组合成的疫苗，可以实现针对布鲁氏菌感染更有效的免疫应答。有报道从Omp31，OMP28，BLS，DnaK和L7-L12蛋白中选择了5个新的T细胞表位，采用生物信息学技术模拟设计了一种新型多表位疫苗，用以引发对布鲁氏菌病的理想免疫反应,结果表明预防和治疗布鲁氏菌病的理想方法是设计靶向多种蛋白的多抗原表位肽，该疫苗被认为是有潜力的[18]。基于生物信息技术模拟并且评估了该蛋白疫苗的免疫和理化特性，该项技术是一种简便高效的方法。与固定的外膜蛋白相比，OMP28具有易于检测的优势, 是感染牲畜和人类的一种免疫优势抗原，作为诊断抗原，准确率 90 %[19]。在动物中使用减毒活疫苗免疫后，血清样品显示OMP28引起的应答比强毒株弱很多[20]，作为潜在的疫苗靶标有很大的可能性，值得进一步研究。2 OMP2b布鲁氏菌的Omp2b属于第二组外膜蛋白，并且暴露在细胞表面[21]，是重要的36 kD孔蛋白。Omp2b在外膜蛋白中形成三聚体可参与营养的吸收[22]。在布鲁氏菌表面蛋白抗原中，Omp2a和Omp2b同时也被叫作孔蛋白，在经典布鲁氏菌种中显示出最高的多样性。编码这些蛋白质的基因在布鲁氏菌基因组中紧密相连，方向相反。根据布鲁氏菌属的种类，生物变种或基因型共有85 %～100 %的序列同源性[23]。golshani等[24]分析蛋白质的物理化学参数，指出Omp2b是一种酸性(pH，4.53)且稳定的亲水性蛋白,其二级结构是由7个α螺旋组成，该蛋白质具有正确的拓扑结构，并且在相同大小的天然