北中大中药化学实验指导02基本实验项目-1虎杖中蒽醌类成分及白藜芦醇苷的提取分离和鉴定.docxVIP

第二章 基本实验项目 实验一 虎杖中蒽醌类成分及白藜芦醇苷的提取分离和鉴定 虎杖系蓼科蓼属植物（Polygonum cuspidatum sieb. et zucc.）的根茎，又名阴阳莲。味苦，性微寒，具有泻下、健胃、清热、解毒之功。民间多用于消炎、杀 菌、利尿、通经、镇痛，近年来用于烫伤、止血、消结石、降血脂的治疗。近年来用于治疗烫伤、止血、消结石和降低血脂均有疗效。虎杖根茎中含有大量的蒽醌成份和二苯乙烯类成份，后者具降血脂的作用。 一、部分已知成分的理化性质 1. 大黄素（Emodin）： 橙黄色长结晶（丙酮中为橙色，甲醇中为黄色），mp.256℃—257℃，能升华。其溶解度如下：Et2O 0.14%，CCl4 0.01%，CHCl3 0.0718%，CS2 0.009%，乙醚0.14%；易溶于乙醇；可溶于氨水、Na2CO3和NaOH水溶液；几乎不溶于水。 2. 大黄素-6-甲醚（Physion）： 金黄色针晶，mp.207℃，能升华。溶解性与大黄酚相似。 3. 大黄素-3-D-葡萄糖苷（Emodin monoglucoside） mp.190℃—191℃，浅黄色针晶，（稀乙醇中结出，含一分子结晶水）。 4. 大黄素-6-甲醚-8-D-葡萄糖苷 mp.230℃—232℃，黄色针晶（稀甲醇中结出）。 5. 白藜芦醇（resveratrol）： 无色针状结晶。mp.256℃—257℃，261℃—264℃，能升华。易溶于乙醚、氯仿、甲醇、乙醇、丙酮等。 6. 白藜芦醇葡萄糖苷（polydatin , peceid）： 又名3，4，5-三羟基芪-3-β-D-葡萄糖苷，mp.225℃，232℃（分解）。无色针状蔟晶。易溶于甲醇、乙醇、丙酮、热水；可溶于乙酸乙酯，稍溶于Na2CO3和NaOH水溶液，难溶于乙醚。 UV：λMeOH maxnm（logε）216（4.42），230sh（4.29），303（4.52），318（4.52） IR：υKBr max（cm-1）3400，1600，1525，1470，1270，1185，1160，1100，1040，970，850，690 附注：此化合物具顺反二种异构体，能互相转化，所得常是二者的混合物以反式为多，故前人工作中所报道的熔点有所不同，按本实验方法所得的白藜芦醇苷结晶含一分子结晶水，在130～140℃先融化，继续加热固化，至225～226℃全熔。 二、实验目的 1. 学习脂溶性成分（苷元）和水溶性成份（苷）的分离方法。 2. 学习用pH梯度萃取法分离酸性不同的蒽醌类成分。 3. 了解蒽醌类成分的一般性质和鉴别反应。 三、实验原理 根据游离蒽醌与苷溶解性能的差异，先用乙醚萃取出游离蒽醌等脂溶性成份，从而使脂溶性成分（苷元）和水溶性成份（苷）得到分离。再根据虎掌中蒽醌类成分由于结构中酚羟基数目及位置不同而成不同强度的酸性，用碱性递加的的水溶液（5%NaHCO3，5%Na2CO3，2%NaOH）自乙醚中提出不同酸性强弱的游离蒽醌类成分，达到分离的目的。 四、提取分离流程 五、溶剂、试剂、展开剂及显色剂 1. 原料：虎杖粗粉 50g 2. 溶剂： 90-95%乙醇 500ml，80%乙醇 200ml，乙醚 500ml，CHCl3，MeOH 各50～100ml。 3. 试剂： HCl，NaHCO3，Na2CO3，NaOH，无水硫酸钠，活性炭（2g），Al2O3（30g），硅胶G。 4. 展开剂： （1）石油醚（bp30～60℃）-甲酸乙酯-甲酸（15:5:1，上层）15ml。 （2）氯仿-甲醇（9:2） 5. 显色剂 （1）5%KOH/MeOH液 （2）1%FeCl3-1%铁氰化钾（1:1） 6. 定性试剂 2%NaOH，0.5%Mg（Ac）2 六、实验方法 1．乙醇总提取物的制备 取虎杖粗粉50g，用90～95%乙醇回流提取二次（200ml 1h；150ml 1h），过滤合并乙醇液，如有沉淀，抽滤，滤液减压回收乙醇至无醇味，得乙醇总提取物。 2．总游离蒽醌的提取 将上述提取物，加入15ml水稀释至分液漏斗中，用乙醚萃取（25ml×2，20ml×4），合并乙醚液即为总游离蒽醌。乙醚萃取后的水层含有水溶性成分。 3．游离蒽醌得分离 （1）大黄素的分离 上述乙醚液移至分液漏斗中，用5%NaHCO3水溶液萃取3～4次（20ml×2，15ml×1～2），弃去NaHCO3液。乙醚溶液再用5%Na2CO3水溶液萃取7～9次（25ml×2，20ml×2～3，15ml×3～4）。合并Na2CO3萃取液，挥去碱液中的乙醚，碱液在搅拌下慢慢滴加6NHCl调PH=2，稍放置，抽滤，沉淀水洗至中性，干燥，称重。沉淀物用20ml环己烷-丙酮（7:3）溶解后，经硅胶柱层析（15g），环己烷-丙酮（7:3）洗脱