北中大中药化学实验指导03综合实验项目.docxVIP

第三章 综合实验项目 实验一 中药化学成份的系统预试验操作 在研究一未知样品时，多采用中药化学成分的系统预实验。先根据各化学成分的溶解性不同，选用适当的溶剂，极性梯变，顺次将各类溶解性相近的成分提出。例如：石油醚、汽油、苯可溶解油脂、挥发油、植物甾醇、某些生物碱、亲脂性强的香豆素等亲脂性化合物；乙醚可提取出树脂、内酯、黄酮等化合物；氯仿可提取有利生物碱；丙酮、乙醇、甲醇则可提取出一些生物碱及其盐，有机酸及其盐、苷类、鞣制、无机盐类等化合物。通过制备预实验的溶液，可减少各成分间的相互影响，提高预试的效果。一般工作中常根据水能提取极性物质，石油醚可提取非极性物质，醇能提取大多数成分等特点，采用石油醚、95%乙醇和水为溶剂对样品进行分别提取。 预实验的结果仅能作为进一步提取分离有效成分的初步线索。由于植物中各成分的复杂性和相互干扰，各定性反应常有例外，例如：碘化铋钾试剂，不仅对生物碱发生反应，对碱性氨基，生物胺等同样也发生反应。生物碱沉淀反应作为预实验阴性结果可做出无生物碱存在的结论，阳性结果实际意义不大，须进一步配合其他反应或配合TLC及PC进行。因此，决不能只跟据预试结果武断作出某种成分存在与否的结论。为进一步了解所含成分单体的个数和情况可配合TLC和PC。 一、实验目的 掌握中药成分的预试验方法，总结中药中各主要化学类型成分的理化性质。 二、实验原理 根据中药化学成分溶解度不同进行溶剂系统提取分离，达到分类，再利用各种沉淀试剂和显色剂进行预试，并配合TLC及PC，初步判断和了解各部分中可能含有的化学成分。 三、溶剂及试剂 95%乙醇 150ml，石油醚 150ml，1%HCl 30ml，氯仿 40ml，氨水适量。 四、实验操作 （一）与实验溶液的制备 1．水提取液 此滤液供糖、多糖、有机酸、皂苷、苷类、酚类、鞣质、氨基酸、生物碱等项的预试。 2．乙醇提取液 3．石油醚提取液 样品粗粉1g，加10ml石油醚（60～90℃）放置2～3h，过滤，滤液放在表面皿上，让石油醚挥发，用残留物进行萜类、甾类、脂肪等的检查。 （二）各类成分检查 1．生物碱 （1）碘—碘化钾试剂：取检液F 2ml于试管中若中性要酸化至酸性，滴加碘—碘化钾试剂2滴，如有棕红色沉淀产生，可能含有生物碱。 （2）碘化铋钾试剂：试剂同上，也呈酸性，加碘化铋钾试剂立即有桔红色或黄色沉淀产生，亦可能有生物碱。本反应于纸片上进行较为敏感。 （3）硅钨酸试剂：操作同上，如有生物碱，试液与硅钨酸试剂相遇，即产生类白色或有浅黄色沉淀。 2．氨基酸、多肽和蛋白质 （1）双缩脲试验（Biuret反应）：取1%硫酸铜溶液与10%氢氧化钠溶液等量混合。本试验主要是C++ u与蛋白质或肽类分子中肽键—CONH—络合显色。取1m1检液A，加入 1～3滴 40%氢氧化钠溶液，摇匀，使呈碱性，再逐滴加入1%硫酸铜溶液，边加边摇匀（注意不要过量），如显紫、红或紫红，表示有多肽或蛋白质。 （2）茚三酮试剂（Ninhydrin试剂）：检液A点在纸片上，滴上或喷洒0.2%茚三酮乙醇液后，在100℃左右的烘箱中放置2min，如有氨基酸和肽就显蓝色或紫红色斑点，也有少数氨基酸呈黄色斑点。 亦可在试管中进行，水提液1ml，加试剂2～3滴后在沸水浴上加热5min，冷后有蓝紫色出现，表明有氨基酸或多肽。 [注]除上述成分外，伯胺也会显色。 3．有机酸 （1）用pH试纸检查：取检液D用pH试纸检查，如呈酸性，则可能含有游离酸或酚性化合物。 （2）溴酚蓝溶液：取检液D点于滤纸片上，喷洒0.1%溴酚蓝溶液（溶于7%乙醇中），立即在蓝色背景上显黄色斑点，表明可能含有机酸。如觉得不明显，可再喷洒氨水，然后暴露在盐酸气体中，背景逐渐由蓝色变为黄色，而有机酸斑点仍为蓝色。经过这样一个反复，用pH试纸难以肯定的有机酸样品也可检出。 4．鞣质 （1）1%三氯化铁试验：（样品溶液如为酸性，即可直接进行检查。如为碱性，可加酸酸化后再滴加三氯化铁试剂。）取检液B lml，加1%三氯化铁试剂，如呈蓝墨绿色或蓝紫色，证明可能含有酚类或鞣质。可水解鞣制多为蓝色，缩合鞣制多呈绿色。 （2）明胶实验：取检液B 2ml，加入氯化钠-明胶溶液，如产生白色沉淀，则表明含有鞣质。 5．糖、多糖和苷 （1）斐林试剂（Fehling）：斐林试剂为CuSO4与酒石酸钾钠试剂临用前等体积混合。取检液B 2ml，加入新配制的斐林试剂，在沸水浴上加热数分钟，如产生红棕色氧化亚铜沉淀，证明含有还原糖存在。另取热水提取液，加盐酸，使呈酸性，加热微沸5～10min，使产生水解反应，冷后，调节pH至中性，同上法加斐林试剂，如热水提取液未水解前呈负反应，水解后呈正反应，或水解后产生氧化亚铜沉淀较前为多，表明可能含有多糖、苷类成分。 （2）?-萘酚试验（Molish反应）：取