北中大中药化学实验指导02基本实验项目-2槐花米黄酮苷及苷元的提取和鉴定.docxVIP

实验二 槐花米黄酮苷及苷元的提取和鉴定 槐花米系豆科槐属植物（Sophora japonica. L）的花蕾。历来作为止血药物治疗痔、子宫出血、吐血、鼻衄等。其所含主要成分为芦丁（Rutin，亦称芸香苷），其含量高达12～16%。药理试验证明芦丁有调节毛细血管渗透作用，临床用于治疗毛细血管性止血药，作为高血压症的辅助药物。 芦丁广泛存在于植物中，现已发现含芦丁的植物达70种以上。 一、主要黄酮类成分的物理性质 （1）芦丁（芸香苷，Rutin） 淡黄色针状结晶，熔点：含三分子结晶水物174℃—178℃；无水物为188℃。 芦丁溶解度见下表： 水 甲醇 乙醇 吡啶 冷 0.0043 1.0 0.36 8.5 热 0.55 11.2 3.5 易溶 不溶于乙醚、氯仿、石油醚、乙酸乙脂、丙酮等溶剂。易溶于碱液且呈黄色，酸化后复析出。可溶于浓硫酸和浓盐酸且呈棕黄色，加水稀释复又析出。 UV：λMeOH maxnm（logε）259，266sh，299sh，359 (2)槲皮素（Quercetin）： 黄色结晶，熔点：含两分子结晶水物313℃—314℃，无水物316℃。 溶解度：乙醇 1:290，无水乙醇1:23(沸时)，可溶于甲醇、乙酸乙脂、冰醋酸、吡啶、丙酮等溶剂，不溶于水、乙醚、苯、氯仿、石油醚。 UV：λEtOH maxnm（logε）255，269sh，301sh，370 二、实验目的 1．了解黄酮类化合物的一般性质。 2．学习聚酰胺TLC法在黄酮类化合物中的应用。 3．掌握由黄酮苷水解制取黄酮苷元的方法及糖的检识方法。。 4．通过测定芦丁及槲皮素的紫外光谱，进一步了解如何利用紫外光谱对黄酮类化合物进行结构测定。 三、实验原理 1．利用芦丁可溶于热水，难溶于冷水的性质进行提取、精致。 2．黄酮苷可通过酸水解得到苷元和糖，并可通过TLC、PC及乙酰化合物制备进行检识。 3．不同黄酮类化合物对紫外光有特定吸收，可利用此对其进行结构测定。 四、提取精致流程 五、溶剂、试剂、展开剂及显色剂 1. 原料：槐花米 30g 2. 试剂： 1%H2SO4 100ml，BaCO3，甲醇50ml，醋酐，浓H2SO4，95%乙醇，层析纸，聚酰胺薄膜（3×10cm），硅胶 3. 标准品： 葡萄糖，鼠李糖，芦丁，槲皮素 4. 展开剂： （1） 80%乙醇 （2） n-BuOH-HAc-H2O(4:1:5)上层液 15ml （3） n-BuOH-HAc-Alc-H2O(4:1:1:0.25) 5. 显色剂： 苯胺—邻苯二甲酸盐试剂，浓氨水，1%AlCl3 6. 定性试剂： 10%α-萘酚溶液，浓H2SO4，浓HCl，镁粉，FeCl3乙醇液，1%Mg（Ac）2甲醇液，1% AlCl3乙醇液，2%ZrOCl2甲醇液，2%柠檬酸甲醇液。 六、实验方法 1. 芦丁的提取 称取槐花米30g，研碎后，置烧杯中，加热水（50℃以上）300ml，煮沸15分钟，趁热过滤，滤渣再分别用200ml热水煮提两次，每次10分钟，趁热过滤，放置过夜，可析出大量沉淀，等沉淀完全，滤取沉淀，放置自然干燥，即得芦丁粗品。 2. 芦丁的精制 上述沉淀称重后加入100倍量的热水溶解，趁热过滤，放冷析出结晶，结晶自然干燥（或在红外灯下干燥），得芦丁水精制品。 3. 芦丁的水解 称取芦丁水精制品 0.5g，置 250ml圆底烧瓶中加1%H2SO4（V/V）50ml，直火回流30分钟（注意观察现象），放冷过滤（滤液留作糖的鉴识），沉淀物为芦丁苷元—槲皮素的粗品，水洗至中性用60%乙醇（70～80倍量）重结晶，干燥称重，得槲皮素精品。 4. 糖的检识（PC和TLC） 取水解滤液20ml，水浴上加热，加固体BaCO3中和至中性（不断搅拌下进行），滤除白色BaSO4沉淀，滤液蒸干后加2～3ml甲醇溶解，作层析检识样品溶液。 对照品：葡萄糖，鼠李糖 TLC吸附剂：硅胶展开剂： PC：n-BuOH-HAc-H2O(4:1:5)上层液 TLC：n-BuOH-HAc-Alc-H2O(4:1:1:0.25) 显色剂：苯胺-邻苯二甲酸盐试剂，喷雾后，105℃加热5～10分钟至显棕色或棕红色斑点。 5. 芦丁及槲皮素的聚酰胺TLC 吸附剂：聚酰胺-6薄膜对照品：芦丁、槲皮素标准品的甲醇溶液样品： 1%芦丁、槲皮素的甲醇溶液 展开剂：80%乙醇 显色剂：1%AlCl3乙醇液显色后，紫外光（365nm）下观察。 6. 槲皮素乙酰化物的制备 称取精制槲皮素5mg置10ml干燥三角瓶中，加5ml醋酐和一滴H2SO4振摇，完全溶解后放置24h，倾入30ml冷水中，不断搅拌，则析出白色结晶。滤取沉淀洗涤，以90～95%乙醇重结晶，得槲皮素五乙酰化物的白色结晶。 7. 芦丁及苷元的的定性反