植物油中白藜芦醇和白藜芦醇苷的测定 高效液相色谱法.pdfVIP

植物油中白藜芦醇与白藜芦醇苷的测定 高效液相色谱法 1 范围 本文件规定了本文件规定了植物油中白藜芦醇和白藜芦醇苷含量的高效液相色谱法测定方法。 文件适用于花生原油、花生成品油、葡萄籽原油、葡萄籽成品油中的白藜芦醇和白藜芦醇苷的测定。 本方法的检出限为 40 µg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 15687 动植物油脂 试样的制备 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 白藜芦醇 resveratrol 白藜芦醇是非黄酮类多酚有机化合物,主要来源于花生、葡萄、虎杖、桑椹等植物。 3.2 白藜芦醇苷 resveratrol glycoside 白藜芦醇与葡萄糖结合形成白藜芦醇葡萄糖苷，天然分布于花生、葡萄、虎杖、桑椹等植物。 4 原理 样品中的白藜芦醇和白藜芦醇苷用乙醇-水溶液提取，取上清液过膜，用高效液相色谱分离，在波 长310nm条件下采用紫外检测器测定白藜芦醇和白藜芦醇苷含量，外标法定量。 5 试剂 除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。 5.1 甲醇：色谱纯； 5.2 乙醇：色谱纯； 1 5.3 75%乙醇-水溶液:取750mL 乙醇 （4.2），加250mL 水，混匀； 5.4 白藜芦醇标准品：CAS 号501-36-0，纯度≥99%； 5.5 白藜芦醇苷标准品：CAS 号65914-17-2，纯度≥97%； 5.6 标准储备溶液：分别准确称取白藜芦醇和白藜芦醇苷标准品5.0 mg,用甲醇溶液溶解并定容至 100mL，即为50 mg/L 的单标储备液，于-18℃下，储存于密封的棕色玻璃瓶中，保存有效期3 个月。 5.7 混合标准工作溶液：在使用中将标准储备液混合，并逐级稀释1 mg/L、5 mg/L、10 mg/L、15 mg/L、25 mg/L 或其它浓度的白藜芦醇和白藜芦醇苷的混合标准工作溶液。 5.8 滤膜：0.45 μm,有机相滤膜。 6 仪器 6.1 高效液相色谱仪：配紫外检测器； 6.2 高效液相色谱柱：C18 柱（250mm×4.6mm，5 μm），或等效柱； 6.3 分析天平：感量0.0001g； 6.4 旋转蒸发仪； 6.5 超声波振荡器。 6.6 涡旋振荡器。 7 试样制备 按GB/T 15687执行。 8 操作步骤 8.1 提取 称取试样1 g于50 mL离心管中，加入2 mL正己烷，摇匀；加入20 mL 75%乙醇-水溶液，涡旋振荡5 min； 超声振荡20分钟。试样在5000 rpm条件下离心10 min；量取5 mL下层提取液，置于蒸馏烧瓶中以60℃旋 转蒸发至干燥，加入2 mL甲醇溶液复溶，微孔滤膜过滤至进样小瓶, 待上机分析测定。 8.2 色谱条件 流动相：A：水，B：甲醇； 柱温：35℃； 检测器：紫外检测器，波长310nm； 进样量：10μL。 梯度洗脱条件：见表1 表1 梯度洗脱表 时间（min） 流速（mL/min） 流动相A （%） 流动相B （%） 2 0 1.0 65 35 5 1.0 40 60 11 1.0 10 90 15