粮食与食品微生物学 课件 13.7 免疫学方法及其应用.ppt

第六章 传染与免疫 知识点7 免疫学方法及其应用 一、抗原、抗体反应的一般规律 1、特异性 2、可逆性 3、定比性 4、阶段性 5、条件依赖性 1、凝集反应 2、沉淀反应 3、补体结合试验 4、中和试验 二、抗原、抗体间的主要反应 概念：细菌和红细胞等颗粒性抗原，当与相应抗体在合适条件下反应并出现肉眼可见的凝集团现象 凝集原：反应中的抗原 凝集素：反应中的抗体 注意：在实际操作时，一般要稀释抗体 方法：直接法、间接法 （一）凝集反应 凝集试验示意图 凝集反应的特点 1. 两个阶段 抗原抗体特异性结合 可见凝集现象 2. 结果判断：以定性试验为主（阴性或阳性）， 或可半定量 3. 灵敏度：高于沉淀反应 4. IgM的作用比IgG大数百倍 概念：可溶性抗原（细菌培养滤液、细胞或组织的浸出液、血清蛋白等）与相应抗体在液相中特异结合后，形成的复合物出现沉淀的现象。 沉淀原：反应中的抗原 沉淀素：反应中的抗体注意：在操作时，一般要稀释抗原 （二）沉淀反应 沉淀反应的主要方法： 经典方法 现代方法 环状沉淀反应 絮状沉淀反应 单向琼脂扩散法 双向琼脂扩散法 对流免疫电泳法 火箭电泳法 双向免疫电泳法 液体内沉淀试验 琼脂内 沉淀试验 凝胶电泳试验 环状沉淀反应 絮状沉淀反应 将抗体混入0.9%琼脂内（50℃ ），未凝固前倾注成平板，凝固后打孔（直径3～5mm ），孔中加入抗原溶液，置湿盒内37℃,24～48h 观察孔周围是否出现沉淀环。 单向琼脂扩散法 （平板法） 双向琼脂扩散法 （平板法） 对流免疫电泳法 火箭电泳法 火箭电泳法 （三）补体结合试验：可用于检测未知抗体或抗原 5种成分参与反应，分属于3个系统 1、反应系统中存在待测的抗体（或抗原），则抗原抗体发生反应后可结合补体；再加入指示系统时，由于反应液中已没有游离的补体而不出现溶血，是为补体结合试验阳性。 2、反应系统中不存在的待检的抗体（或抗原），则在液体中仍有游离的补体存在，当加入指示系统时会出现溶血，是为补体结合试验阴性。 补体结合试验可用已知抗原来检测相应抗体，或用已知抗体来检测相应抗原。 ? ? (四）中和试验 是免疫学和病毒学中常用的一种抗原抗体反应试验方法，用以测定抗体，中和病毒感染性或细菌毒素的生物学效应。 中和抗体：凡能与病毒结合，使其失去感染力的抗体。 抗毒素：能与细菌外毒素结合，中和其毒性作用的抗体。 免疫酶技术——将抗原和抗体的特异性免疫反应与酶的催化反应相结合而建立的一种免疫检测技术。 免疫酶标记技术——利用酶标记抗体或抗原，以检测相应抗原或抗体的一种免疫学标记技术。 三、免疫酶标记技术 酶联免疫吸附法 （Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay，ELISA） 一类常用的免疫酶技术 将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使抗原抗体反应在固相表面进行。 常用的酶：辣根过氧化物酶(HRP) 碱性磷酸酶（AP） ELISA基本原理 使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性 使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性 结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关 在ELISA方法中有三个必要的试剂： （1）固相的抗原或抗体，即“免疫吸附剂” （immunosorbent） （2）酶标记的抗原或抗体，称为“结合物”（conjugate）(标记物） （3）酶反应的底物（显色剂） 特点 本法主要用于对病原体抗体的检测而进行传染病的诊断。 只要变换包被抗原就可利用同一酶标抗体检测相应抗体。 成功的关键在于抗原的纯度。特别应注意除去能与一般健康人血清发生反应的杂质。若抗原中含有无关蛋白，也会因竟争吸附而影响包被效果。 ELISA的应用 免疫酶染色各种细胞内成份的定位 研究抗酶抗体的合成 显现微量的免疫沉淀反应 定量检测体液中抗原或抗体成份 ELISA在食品检验中的应用 细菌、真菌、病毒及其毒素的检测 药物残留、抗生素的检测 ELISA试剂盒 酶标分析仪 * * * * * * * * * * * * * * * *