高效液相色谱法同时检测人尿液中10种常见安防物.docxVIP

高效液相色谱法同时检测人尿液中10种常见安防物 安眠药广泛应用于镇静、催眠和焦虑的临床应用。但是，如果超过正常的治疗剂量，或者可以长期使用正常的治疗剂量，则可能会形成这种药物的依赖。 1 材料表面 1.1 电子击穿离子源及化学从根 Agilent 7890A/5975C气相色谱-质谱仪, 配有电子轰击离子源 (EI) 及化学工作站 (美国Agilent公司) ;氮吹仪、离心机、超声波发生器均购于大连依利特分析仪器有限公司。 1.2 对照品、对照品、氯丙嗪、氯丙嗪、氯丙嗪、氯丙嗪、氯丙嗪、氯丙嗪、氯丙嗪、氯氮平对照品、水生活剂的配制 巴比妥对照品、苯巴比妥对照品、异戊巴比妥对照品、司可巴比妥对照品、地西泮对照品、硝西泮对照品、阿普唑仑对照品、咪达唑仑对照品、氯丙嗪对照品、氯氮平对照品购自上海司法部司法鉴定中心。10种药物用无水甲醇均配成1.00 g/L的标准贮备液, 置于4℃冰箱中冷藏, 使用时再逐级稀释。甲醇、乙醚等均为分析纯。 2 方法 2.1 色谱进样设置 色谱柱:HP-5MS型毛细管柱 (30 m×0.25 mm, 0.25μm) ;进样口温度:250℃;传输线温度:280℃;色谱柱程序升温:初温100℃保持1.5 min, 以25℃/min程序升温至280℃, 保持15 min;载气:氦气;流速:1.0 ml/min;恒流模式;1∶30分流进样;进样量:1.0μl。 EI电子能量:70 e V;离子源温度:230℃;四级杆温度:150℃;电子倍增器电压:1 326 V;扫描范围:m/z 50~500;扫描方式:选择离子扫描 (SIM) 。 2.2 残留液的提取 取空白健康人尿样加入“1.2”项下10种标准贮备液, 配制成各个药物浓度的标准尿样。取尿液样品2 ml置于10 ml离心管中, 加1滴1 mol/L HCl溶液使呈酸性 (p H=3) , 加入乙醚3 ml超声波振荡提取10 min, 离心使之分层, 转移出乙醚提取液于5 ml试管中;残留液中再滴加10%Na OH溶液2~3滴, 使之呈碱性 (p H=11) , 再次用乙醚3 ml超声波振荡提取残留液5 min, 离心使之分层, 转移乙醚层;合并乙醚提取液, 氮吹仪浓缩至干, 残留物加甲醇50μl溶解, 供检。 2.3 最佳ph的确定 调节提取溶液的p H值可以改变分配比, 进而可改变提取效果。本试验将调节体系的p H值分别设定为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12进行比较试验。结果表明, 当p H=3时, 巴比妥、苯巴比妥、异戊巴比妥、司可巴比妥、地西泮、硝西泮的峰面积最大, 回收率最高, 提取效果最好;当p H=11时, 阿普唑仑、咪达唑仑、氯丙嗪、氯氮平的峰面积最大, 提取效果好。因此, 本研究采用酸碱提取法, 分别在p H为3和11时对10种安眠药物乙醚提取。 2.4 超声时间的选择 在1~10 min超声振荡时间内, 随着超声振荡时间的增加, 药物的回收率逐渐提高, 超声时间在10 min时提取回收率接近100%, 所以选择超声时间为10 min。 2.5 组分分离和色谱柱长 由于这10种药物的沸点高低各异, 所以采用0.25μm的较薄液膜, 在兼顾高、低沸点组分的同时, 可以保证在高温的条件下组分出峰较快, 柱子流失小, 易于组分的分离。同时采用柱长为30 m色谱柱, 可以实现各个组分的有效分离。另外, 本研究比较了几种不同的色谱柱对分离结果的影响, 包括DB-1701 (30 m×0.25 mm, 0.25μm) , DB-1 (30 m×0.25 mm, 0.25μm) , HP-5MS (30 m×0.25 mm, 0.25μm) , 发现使用弱极性的HP-5MS (30 m×0.25 mm, 0.25μm) 石英毛细管色谱柱能够实现被检物质与基质的良好分离。 2.61 色谱离子检测 在空白尿液添加上述10种安眠药物 (3μg/ml) , 按“2.2”项方法预处理后采用SIM检测, 每种药物均选择2~3个监测离子, 样品峰质谱离子的相对丰度与标准品峰质谱离子基本一致, 才能确定样品中含有目标物质。空白尿液的选择离子色谱图见图1A, 10种药物的混合标样的选择离子色谱图见图1B, 色谱保留时间和质谱特征离子见表1。 2.7 尿样的测定 取空白尿液加10种药物标准贮备液混合, 配成药物质量浓度分别为0.50、1.00、3.00、5.00、10.00、15.00μg/ml的标准尿样, 按“2.2项”方法操作, 记录色谱。以药物峰面积 (Y) 对药物质量浓度 (X) 绘制标准曲线并求得直线回归方程和相关系数, 以3倍信噪比计算检出限, 结果见表2。 2.8 分析性能评价结果 取空白尿液加10种药物标准贮备液混合, 按照“2.2”项下方