聚乙烯醇-羧甲基纤维素钠复合膜预防血管开放术后黏连的安全性与疗效.docxVIP

聚乙烯醇-羧甲基纤维素钠复合膜预防血管开放术后黏连的安全性与疗效 近20年来，心血管外科技术发展迅速，疑难手术数量日益增多，再开放率也在不断提高。 1 表面质量和细胞毒性实验 材料:PVA-CMC复合膜 (三层) 规格为5 cm×5 cm, 制备方法见后。新西兰大白兔:体重2.5 kg, 不分雄雌。实验过程中对动物的处置符合2006年科技部《关于善待实验动物的指导性意见》的规定。 防黏连膜的制备及理化性质检测: (1) 复合膜制备:中间凝胶膜层中PVA-1799:CMC以30:2的比例同时溶解于120份离子水中得到混合溶液, 并以5 mg/ml的剂量加入塑形剂, 将此混合溶液流延至玻璃培养皿中至厚度500μm, 然后冷冻-解冻过程循环三次后即制备完成。上下薄膜层中PVA-1788:CMC以2:1的比例同时溶解于离子水中得到混合溶液, 以上述方法经过3次冷冻-解冻过程即可。将制作完成的复合膜成分放入环氧乙烷保鲜袋中行环氧乙烷灭菌, 并在常温下保存备用。 (2) 厚度测定:将干态膜干燥至恒质量, 千分尺测定膜的9个不同位置的厚度, 取平均值为干态膜的厚度。将膜浸泡在蒸馏水中24 h, 吸干其表面水分, 如上同法测定并取平均值为湿态膜的厚度。 (3) 含水率测定:将膜浸泡在常温的蒸馏水中24 h, 用滤纸吸干其表面的水分, 从膜上均匀裁剪数个1.0 cm×1.0 cm的样品, 并称质量取得平均值 (w1) 。将这些样品放于70℃的烘箱中烘干至恒质量, 取平均值 (w) 。膜的含水率 (%) = (w1-w) /w×100%。 (4) 溶胀比测定:将干态膜裁剪成直径为2.5 cm的圆片, 浸泡在蒸馏水中溶胀24 h。用千分尺测量圆片的直径 (φ) 和干态及湿态膜 (σ) 的厚度。 细胞毒性实验:依据国家标准GB/T 16175-2008 皮内刺激实验:采用3只体重约2.5 kg的新西兰大白兔, 按顺序进行生理盐水 (背部最左) 、生理盐水浸提液 (背部最右) 、芝麻油 (脊正中线右侧) 、芝麻油浸提液 (脊正中线右侧) 皮内注射, 注射剂量为0.2 ml/每注射点, 注射点之间间隔2 cm, 共10个注射点。注射完成后在1 h、24 h、48 h和72 h时分别进行拍照, 并观察注射的部位有无红斑或水肿等情况, 按照皮内刺激反应记分系统进行评分, 并计算原发性刺激指数 (PII) 。 动物颈动脉模型建立:新西兰白兔16只 (体重2.5 kg, 雌雄不限) , 将兔进行自身对照, 即一侧颈动脉PVA-CMC复合膜植入 (实验组) 和对侧颈动脉实施假手术 (对照组) 。于气管旁胸锁乳突肌深面, 分离兔颈总动脉, 小心游离颈总动脉周围组织, 并摩擦使之明显渗血, 注意保护伴行神经。将PVA-CMC三层膜裁剪成适合大小约15 mm×8 mm, 置入并包裹一侧颈总动脉, 用6-0 PROLENE缝线标记及固定其位置, 于对侧颈部单纯游离颈总动脉, 摩擦使之明显渗血后用6-0 PROLENE缝线标记其手术位置。 动物实验标本采集与观察: (1) 大体观察:术后4周、12周分别处死实验兔各8只, 肉眼观测术区颈动脉与周围组织黏连的程度, 并行黏连程度分级:0级 (无黏连) 、Ⅰ级 (黏连轻薄, 分离不易出血) 、Ⅱ级 (中度黏连, 需要一些锐性分离, 这个过程导致中度出血) 、Ⅲ级 (黏连致密、弥漫, 需要大量的锐性分离, 容易出血) 。 (2) 组织学观察:将兔双侧颈动脉与周围黏连最明显部位的组织一起取出, 于10%甲醛固定48 h后石蜡包埋并切片, 苏木精-伊红 (HE) 染色并封片。显微镜下观察血管与材料及周围组织的病理情况, 微观黏连评分系统将组织炎症进行分级:0级 (无炎症反应, 未见炎性细胞) 、Ⅰ级 (轻度炎症反应, 可见少量淋巴细胞和浆细胞、偶可见巨细胞) 、Ⅱ级 (中度炎症反应, 可见嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、巨细胞) 、Ⅲ级 (许多炎性细胞, 可见微小脓肿) ;同时再对组织周边纤维化反应进行分级:0级 (无纤维化反应) 、Ⅰ级 (轻度、疏松、局限性纤维化) 、Ⅱ级 (中度纤维化, 薄层局灶纤维结缔组织, 纤维素沉积) 、Ⅲ级 (致密、厚层、弥漫性纤维化) 。 统计学处理:采用SPSS 23.0统计软件进行分析。两组独立样本比较采用Mann-Whitney U检验, 以P0.05为差异有统计学意义。 2.1 一般情况下 16只实验兔术后精神、饮食、活动正常, 均存活, 切口愈合好, 无红肿、渗出或窦道形成。取材前可见颈动脉周围组织无损伤。 2.2 复合膜+盐水浸提液(pva-cmc)材料特性表征 理化检测: (1) 厚度测定:干态膜厚度为 (0.320±0.185) mm;湿态膜厚度为 (0.819±0.210) mm。 (2