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小鼠肝纤维化模型的建立 肝硬化是一种危害人类健康的常见疾病。这也是肝脏疾病的一个重要组成部分。目前，人们对其的预防和控制缺乏理想和有效的手段。国内对肝纤维化的模型及中药防治的研究方兴未艾, 笔者作了进一步研究。报道如下。 1 1.1 动物分组和模型构建 ICR小白鼠65只, 均雄性, 18.2～25.4g, 由浙江省医学科学实验动物中心提供。全部小鼠分为 4组, 即模型组 (n=20) 、预防组 ( n= 17) 、治疗组 ( n= 20) 和空白对照组 ( n =8) 。各组小鼠体重无显著性差异。 1.2 以酒精发酵为原料生产的抗菌药 二参泽术汤由丹参、党参、白术、泽泻等组成。药材由浙江省中医药研究院提供, 以 75 %酒精浸泡24h, 旋转蒸发仪 (2FQ85A型, 上海电子管十一厂生产) 提纯, 相当于含生药9g/ml。 1.3 动物造模成功的检测 各组动物先以 380mg/L苯巴比妥钠溶液代水自由饮用1周后, 开始造模。除空白对照组给生理盐水0.2ml/只/ 4天外, 其它3组动物均每4天以10%四氯化碳菜油溶液0.2ml /只喂饲。第 7周, 模型组小鼠处死一半作病理检查并证实造模成功。预防组在造模开始同时每天按 0.2ml/只以二参泽术汤喂饲;剩下的10只模型组小鼠和治疗组自第8周开始 (即造模成功后) 用和预防组同样剂量的二参泽术汤喂饲。第11周实验结束, 处死全部小鼠。 1.4 光镜观察试验 将各组动物的肝, 经固定于10%福尔马林后, 取材, 石蜡包埋, 切片, 苏木素伊红染色, 供光镜观察。 1.5 透射电镜观察 取肝组织用 2.5 %戊二醛、1%锇酸固定, 0.1M PBS漂洗, 0.2 %醋酸铀液染色, 逐级酒精, 丙酮脱水, 环氧树酯 812浸透, 包埋, 经超薄切片, 供Philips EM410型透射电镜观察, [加速电压60 kV]。 2 2.1 构均正常,未见纤维化及肝胰腺的死亡 肝组织光镜及超微结构均正常, 未见纤维化及肝细胞坏死, 见附图 (1) 。 2.2 肝组织结构改变 光镜检查见肝细胞广泛脂肪变性坏死, 汇管区大量胶原纤维组织增生, 并伸入坏死肝小叶内。电镜检查见肝细胞胞质疏松, 充满大量脂滴, 核膜凹凸不平, 染色质固缩, 核仁消失。线粒体极度膨胀, 嵴减少或消失, 基质变淡。粗面内质网减少, 扩张并脱颗粒。核糖体显著减少, 滑面内质网增多呈泡状, 周围有少量糖原颗粒。肝细胞间隙增宽, 充满坏死物碎片或胶原纤维。肝血窦内也有多量坏死物质和胶原纤维。血窦壁窗孔消失成为连续性结构。窦周间隙明显增宽, 有大量胶原纤维沉积, 微绒毛减少或消失。贮脂细胞体积增大, 胞质内见少量脂滴, 粗面内质网、线粒体增多。汇管区有大量胶原纤维及成纤维细胞增生并伸入肝小叶内, 见附图 (2) 。 2.3 粗面质网及内质网 光镜检查肝组织结构基本正常。电镜下可见少数肝细胞内可见脂滴, 核形态正常。线粒体丰富, 嵴存在, 基质较深。粗面内质网及核糖体较多。滑面内质网略膨胀, 周围糖原颗粒较多。肝窦通畅, 窦壁较薄, 窦周间隙增宽, 微绒毛较多。部分贮脂细胞增大, 脂滴减少, 粗面内质网增生。贮脂细胞周围仅见少量肝原纤维增生, 见附图 (3) 。 2.4 组织病理学检测指标 肝细胞结构正常。肝细胞无变性坏死。核大而圆, 核膜平滑, 染色质清晰, 核仁明显。线粒体增多, 形态正常, 仅个别稍肿大。粗面内质网增多, 呈平行排列。滑面内质网也增多, 呈小泡或囊状, 周围有丰富的糖原颗粒。肝血窦通畅, 窦壁薄, 有丰富的窗孔。窦周间隙正常, 微绒毛丰富。贮脂细胞有大量脂滴, 细胞器较少。汇管区未见纤维组织增生, 见附图 ( 4) 。 3 肝纤维化、织物 进行肝纤维化的防治研究, 首先要建立起与人肝纤维化病变、性质及发展等规律比较接近的肝纤维化动物模型。目前文献中记载的造模方法较多 四氯化碳中毒结合口服苯巴比妥制造肝纤维化模型的优点是周期较短, 操作简单, 效果确实, 且适合于各种病因发病机制尚未完全阐明的肝纤维化的研究, 值得推荐。 目前中医将肝纤维化、肝硬化分为 23个证型, 临床上常见的证型有:气滞血瘀型、湿热蕴结型、气阴两虚型、血瘀水停型等, 因此, 治疗的方法也有活血化瘀法、清热利湿法、疏肝理气解郁法、健脾化湿法等 二参泽术汤防治用纤维化的机理除和它能活血化瘀、消肿利水外, 尚能改善肝内微循环, 保护肝细胞, 增强网状内皮系统的吞噬作用, 促进免疫复合物的降解和清除;增强调理素活性, 减轻肝细胞损伤;抑制脂质过氧化物, 减少氧自由基对肝细胞损伤