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基于srap标记构建红麻种质资源分子身份证 0 红麻的应用领域广泛 [研究意义]金钱宝科木槿属（kaf），是锦奎科木槿属的一种一级草本植物。红麻是重要的粗纺原料作物,主要用于生产麻袋、绳索、地毯底布和土工布等。纤维和全秆又是很好的制浆造纸原料,此外,红麻可生产复合材料、环保产品和饲料等,应用领域十分广阔。目前,中国已收集红麻种质资源1800多份,已安全保存770份,并对其农艺性状进行了初步鉴定,还对部分种质进行了抗病性和品质鉴定和评价,筛选出一批丰产、优质、抗病的优良种质 1 材料和方法 1.1 国外栽培种、野生种和近缘种的研究 127份红麻种质资源材料分别来自于肯尼亚、巴基斯坦、赞比亚等28个国家和国内7个省的栽培种、野生种和近缘种(表1)。均保存于国家麻类种质资源中期库。 1.2 提取的dna 采用改良的CTAB法 1.3 公司合成引物 SRAP引物均由上海生工生物工程技术有限公司合成,包括15条正向引物,15条反向引物,共225对引物组合(表2)。 SRAP反应体系10μL,含有1 mmol·L 1.4 系统分析方法 根据扩增结果,用NTSYS 2.1分析软件分析127份红麻种质资源之间的遗传相似系数,用类平均法(UPGMA)对其进行聚类分析并绘制系统树。根据指纹图谱出现的概率公式P=1/2 对电泳中扩增产物清晰可辨的条带进行统计分析,根据扩增片段的大小,对应的分子量从大到小读带。在相同的迁移位置上,当某一扩增条带出现时,赋值为“1”,不存在时赋值为“0”,将电泳谱带转化为数字指纹图谱并建立127份红麻种质资源的分子身份证。 2 结果 2.1 pcr扩增dna片段长度 从225对SRAP引物组合中筛选出多态性较好,且扩增条带清晰的40对引物组合,对127份材料进行扩增(图1),结果表明,不同引物组合扩增出的DNA片段长度在100—1000 bp。40对引物组合在127份红麻种质材料中共扩增出383条DNA片段,其中,375条为多态性片段,总的多态性条带比率(PPB)为97.9%,SRAP在红麻种质资源遗传多样性研究中具有高效性。 2.2 材料组合和近缘种近缘种的筛选 14对SRAP引物扩增出50条特异条带(扩增产物只在一个品种中出现),可鉴别出23个材料(表3),其中,包括16个栽培种、4个野生种和3个近缘种。例如单一的引物组合M5/E1最多只能鉴定3份材料,但是2个引物组合M5/E1和M10/E1就可以区分开8份材料,采用多个引物组合方式鉴定种质资源效率较高。 2.3 多样性与亲水性 利用SRAP标记扩增127份红麻种质资源的遗传相似系数为0.62—0.94,以相似系数为0.70时划分,127份红麻种质资源被划分为4个类群(图2)。Ⅰ类群包括所有供试栽培种和一个近缘种H182,H182为尼泊尔引进种H.sabdariffa,和栽培种亲缘关系较近。遗传系数为0.77时,Ⅰ类群被分为4个亚类,第一亚类包括加纳红等92个栽培品种,表明大部分栽培品种亲缘关系较近,遗传基础狭窄;第二亚类只包含近缘种H182;第三亚类包括国内2个育成品种浙110-1和72-2;第四亚类包括F321等12个栽培品种。Ⅱ类群包括所有供试野生种,ZB217与非洲野生种亲缘关系最近,其次与ZB220亲缘关系较近,ZB217和ZB220来自于赞比亚,而非洲野生种来自于肯尼亚,说明亲缘关系与来源地关系不大。Ⅲ类群为来自坦桑尼亚的2个红麻近缘种H118和H208。Ⅳ类群为8个红麻近缘种,当遗传系数为0.78时,其中7个来自尼泊尔的近缘种聚为一个亚类,来自古巴的85-290自成一个亚类,表明85-290与其它近缘种亲缘关系较远。 2.4 核心引物组合图谱的构建 可以通过特异谱带和多个引物组合2种方法鉴别红麻种质资源。由于具有特征条带的材料较少,因此可以根据2对引物以上的引物组合来区分材料,当2对引物组合不能完全区分开所有材料时,可以增加引物组合数直至区分开所有材料。从15对核心引物组合(M2/E10、M10/E9、M10/E3、M10/E1、M6/E3、M5/E3、M3/E5、M3/E1、M6/E6、M6/E5、M7/E7、M5/E7、M2/E4、M8/E5、M4/E9)扩增的图谱中筛选出多态性好、鉴别效率高的图谱,使之数字化,构建127份红麻种质资源数字指纹图谱(图3)。15对核心引物组合36条谱带构建127份红麻种质资源的分子身份证,根据概率公式1/2 3 红麻栽培品种的遗传相似系数和利用稳定性 本研究利用SRAP标记对127份红麻种质资源进行遗传分析并构建分子身份证。由于SRAP特殊的引物设计,可检测基因的开放阅读框部分,因而体现的是物种基因之间的多态性,更能反映物种的遗传多样性,适合于构建DNA指纹图谱。李媛媛等 本研究中的供试材料来源于不同国家和地区