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腺相关病毒治疗心血管疾病的研究进展 基因治疗是指将正常基因导入目标细胞，纠正或补偿异常基因引起的疾病。AAV作为基因治疗的一种有力载体被广泛应用，从1965年AAV被发现，到1993年重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus,r AAV)第一次被应用于体内实验，再到2017年被FDA批准应用于临床，AAV的研究历程达50多年 1 aav血清型检测 AAV是一种单链DNA病毒，它由直径约26 nm的二十面体蛋白衣壳和长度为4.7 kb的单链DNA基因组构成。蛋白衣壳包含3种类型的亚基，VP1、VP2和VP3 (比例为1:1:10) AAV有多种血清型，最早被发现的血清型是AAV2；感染谱最广的AAV9是从人类肝脏组织中分离出的，应用最为广泛，并且AAV9能穿过血脑屏障，成为通过全身给药转导中枢神经系统的主要衣壳 2 双链dnaraav r AAV被宿主细胞表面的糖化受体识别，通过网格蛋白介导的内吞作用进入细胞。然后，AAV通过由细胞骨架网络介导的细胞质运输。由于内体的p H值较低，在内吞形成的内体酸化之后，病毒衣壳的VP1/VP2部分构象发生变化，导致病毒从内体中脱离，并且通过核孔进入细胞核。进入细胞核后，单链DNA从衣壳中释放出来，利用宿主细胞的DNA聚合酶来合成互补链，或者由两条不同AAV颗粒中释放的互补链退火形成双链DNA r AAV有以下优点：(1)可以感染多种细胞，而且不受细胞分化的影响；(2)致病性低；(3)免疫原性非常低；(4)表达时间相对较长。r AAV可以通过基因替代、基因沉默和递送新基因、基因编辑等方式起到治疗作用 3 rav在心血管疾病中的应用 3.1 调节多因素疾病 大多数心血管疾病是多基因的，并受环境因素的影响。基因治疗不仅能够调节单一基因缺陷的遗传性疾病，而且还可以调节多因素疾病，一些涉及信号通路和代谢的基因已被尝试用于治疗CVD。目前，r AAV基因疗法在治疗心力衰竭(heart failure,HF)、动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)、冠心病、扩张型心肌病、肥厚型心肌病以及心律失常等CVD中起到很好的作用。 3.1.1 md2-ar信号转导 目前，与β-肾上腺素能(β-AR)信号转导、钙离子平衡炎症和氧化应激相关的基因已成为AAV基因治疗HF的主要靶点，均有调节和恢复心脏收缩力的潜力。 在衰竭的心脏中，β-AR信号转导因功能偶联丧失(脱敏)而减弱或下调，靶向β-AR可以阻断神经激素和心肌重构的恶性循环，从而缓解心衰。Mdm2是一个泛素连接酶，可泛素化G蛋白偶联受体激酶2(GRK2)，从而调节β-AR的信号转导。敲除Mdm2使GRK2降解受损，β-AR被锁定在脱敏状态，导致心脏收缩反应迟钝。AAV9递送Mdm2基因可有效挽救Mdm2敲除小鼠的β-AR信号转导反应性，显著增强小鼠心脏收缩 冠脉内注射AAV9-VEGF-B 3.1.2 aav1和al-10治疗ldlr3的临床应用 现已发现多个靶基因是AS发展的关键因素。PCSK9结合肝LDLR，使LDLR在溶酶体中降解，而PCSK9过度活跃会增加人和小鼠的LDL水平。给小鼠单次静脉内注射AAV8/PCSK9，经12周高脂饮食，小鼠总胆固醇迅速增加并维持在高水平，使主动脉中形成AS病变 同时，用编码IL-10和STAT3的两种AAV8载体治疗LDLR缺陷AS小鼠，与对照组相比，单纯AAV8/h IL-10或AAV8/h STAT3治疗组的腹主动脉管腔增大，壁厚减小，主动脉收缩期血流速度明显降低，反映了对AS的抑制作用 由蛋白质G和AAV2特异性抗体组成的亲和桥将AAV2固定在支架表面，赋予AAV载体持续释放的特性，向动脉壁进行特异性转导，使诱导型一氧化氮合酶过表达，抑制损伤血管壁细胞的增殖，能有效预防大鼠支架内再狭窄 在猪心肌梗死模型中通过AAV1共表达VEGF和Ang I，诱导新生血管生成，刺激心肌细胞增殖并减少细胞凋亡，共同改善心脏功能 3.1.3 药养动物心肌cip4基因 CIP4是钙调神经磷酸酶Aβ(Ca NAβ)的支架蛋白，小鼠心肌细胞特异性CIP4基因缺失可减轻压力超负荷引起的病理性心脏重塑和HF；使用竞争性肽阻断Ca NAβ的特异性锚定可抑制培养的心肌细胞肥大；敲除小鼠心肌CIP4基因或使用AAV9基因治疗载体破坏体内锚定可抑制心脏肥大，并改善压力超负荷后的收缩功能 同样，AAV基因治疗也可用于扩张型心肌病。杜氏肌营养不良(DMD)的致病特征是胞浆钙显著升高，肌浆网/内质网钙ATP酶(SERCA)是一种钙泵，在兴奋-收缩偶联过程中将胞浆钙转运到内质网。DMD模型小鼠静脉注射AAV9/SERCA2a，肌浆网/内质网钙摄取量明显增加，SERCA2a治疗能预防心肌纤维化，治疗组小鼠