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不同苜蓿品种在蓟马为害下的生理响应机制研究 季马是中国北方三叶草科植物区最重要的病虫害之一。 蓟马个体小、发育历期短、世代重叠严重，取食寄主汁液，被害处呈斑点或斑纹，造成花瓣褪色、叶片皱缩，甚至整株枯萎 本文研究了甘农9号、阿迪娜等13个苜蓿品种在蓟马为害不同时间段内的丙二醛（MDA）、苯丙氨酸解氨酶（PAL）、超氧化物歧化酶（SOD）、脯氨酸（PRO）、可溶性蛋白的变化，探讨和明确紫花苜蓿对牛角花齿蓟马为害的抗性机理，以期筛选出适合于宁夏不同生态地区种植的品种，为苜蓿生产提供科学依据。 1 材料和方法 1.1 “盐池综合保水指标”项目的种植概况 苜蓿：试验所用苜蓿品种均由“国家牧草产业体系———盐池综合试验站”项目提供，共13个，目前均在宁夏地区种植（表1）。 蓟马：从宁夏农林科学院试验地种植的苜蓿植株上采集发育健壮的蓟马，优势种为牛角花齿蓟马。 1.2 放养及确定接虫品种 根据试验安排，于2017年5月初将供试的13个苜蓿品种在温室种于塑料花盆中，每品种6盆，集中放置，品种间行距1 m，常规管理，不作任何处理。出苗后进行间苗，每盆保留健壮的苜蓿幼苗20株。于6叶期接入牛角花齿蓟马成虫5头/株，以不接虫为对照，每一接虫品种和对照品种单独用养虫笼罩（1 m×1 m×1 m）罩住。于接虫后第1、3、5、7天进行生理生化指标测定。 1.3 测量设计和方法 1.3.1 考马斯亮蓝g-200溶液制备苜蓿中蛋白表达 称取苜蓿叶片0.2 g，加入100 mmol p H为7.8的PBS（内含0.1 mmol EDTA)2 m L，冰水浴研磨，转入离心管。吸取各苜蓿品种粗蛋白液0.1 m L置于试管中，加入考马斯亮蓝G-250溶液5 m L，置于涡旋振荡器上振荡，使之充分混合，放置2 min，于595 nm波长下测定吸光值。 式中，C为提取液中可溶性蛋白质含量（μg，查标准曲线值），V 1.3.2 标准管、待测样品的制备 称取苜蓿叶片0.2 g，加入试剂盒中匀浆介质1.8 m L，冰浴研磨后转入离心管，在离心机上以3 500转/min离心10 min。取上清液待测。空白管加入匀浆介质0.25 m L、缓冲剂0.5 m L、显色剂0.5 m L；标准管加入标准品应用液0.25 m L、缓冲剂0.5 m L、显色剂0.5m L；测定管加入待测样本0.25 m L、缓冲剂0.5 m L、显色剂0.5 m L。沸水浴30 min，流水冷却，双蒸水调零，1 cm光径，520 nm比色。 1.3.3 转/min离心 称取苜蓿叶片0.15 g，加入应用提取液1.35 m L，冰水浴研磨，转入离心管，以3 500～4 000转/min离心10 min，取上清液待测。空白管加入无水乙醇40μL，标准管加入储备液40μL，测定管加入待测样本40μL，共同加入工作液800μL。旋涡混匀器混匀，95℃以上水浴20 min，取出后流水冷却，530 nm，将酶标板空板进行扫描，准确吸取各管反应液0.25 m L加入到新的96孔板中，酶标仪测定各孔吸光度。 1.3.4 管吸收剂用量的测定 称取苜蓿叶片0.1 g，加入试剂盒中的提取液1 m L，冰水浴研磨，转入离心管，10 000转/min,4℃离心10 min，取上清液置于冰上待测。测定管加入样品15μL、应用液585μL、缓冲剂150μL；空白管加入应用液600μL、缓冲剂150μL，混匀，30℃水浴30 min，加入显色剂30μL，混匀，静置10min，双蒸水调零，波长290 nm,1 cm光径，测定各管吸光度值。 式中，V 1.3.5 样品溶液的制备 称取苜蓿叶片0.2 g，加入0.1 mol/L p H7.8的PBS1.8 m L，冰水浴研磨，转入离心管，3 500～4 000转，离心10 min，取上清液待测。测定管加入样品0.025 m L，对照管加入双蒸水0.025 m L，两管中均加入应用液0.5 m L、反应液0.05 m L、缓冲剂0.05 m L、储备液0.05 m L，用漩涡混匀器充分混匀，置37℃恒温水浴40 min。加入显色剂1 m L，混匀，室温放置10 min，于波长550 nm处，1 cm光径比色环，双蒸水调理，比色。 1.4 处理数据 试验数据用Excel2007处理，同时用R软件进行方差分析。 2 结果与分析 2.1 复杂品种可溶性蛋白质含量下降率，以自 可溶性蛋白质作为逆境条件下植物渗透调节能力的指标，其含量的高低可衡量植物代谢强度的强弱。由表2可得，蓟马为害1、3、5、7 d后所有品种均较同期未接虫（对照）可溶性蛋白质含量降低。为害1 d，先行者的可溶性蛋白质含量下降率显著低于其他品种，惊喜下降0.180 5，显著高于先行者、甘农9号。为害3 d，先行者、甘农9号、WL298