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电喷雾离子源法测定蔬菜中有机磷农药残留 为了防止病虫害，农业生产者经常在蔬菜中使用各种农药，留下回来。GB 2763—2014《食品中农药最大残留限量》 实验选取7种常见的农药涕灭威、克百威、苯线磷、倍硫磷、氟虫腈、甲硫威和甲拌磷, 在农业生产中为经常使用的杀虫剂, GB 2763—2014以及欧盟等对其在蔬菜中的限量要求均包含代谢物, 而国内关于蔬菜中多农药残留检测建立的方法中常常只有农药母体, 较少关注代谢物的同时检测, 部分有机磷农药代谢产物在食品中的残留富集对人体的伤害要远高于农药母体。农药及其代谢物的检测, 对食品安全具有更重要的价值, 是未来农药残留检测的热点和难点。要满足国内外关于具有代谢物的农药相关现行法规的限量要求, 必须建立农药及其代谢物的同时检测方法。 目前, Qu ECh ERS法已广泛应用于蔬菜水果农药残留分析中 1 材料和方法 1.1 材料和试剂 十八烷基键合相硅胶 1.2 设备和设备 1 2 0 0高效液相色谱、6 4 3 0三重四极杆MS/MS、 1.3 方法 1.3.1 萃取盐包的制备 称取10 g (精确至0.01 g) 打碎均匀、浆状的蔬菜试样于50 m L具塞离心管中, 准确加入10 m L纯乙腈, 立即振荡, 然后加入萃取盐包 (含4 g Mg SO 1.3.2 净化 取6 m L乙腈提取液转移至装有900 mg硫酸镁、150 mg C 1.3.3 lcms条件 1.3.3. 1.铬条件 色谱柱: 1.3.3. 多反应监测v/dmrm 采用电喷雾离子源 (electrospray ion source, ESI) :电喷雾电压3 500 V, 雾化气压力275.9 k Pa, 干燥气温度300℃, 干燥气流速11.0 L/min (氮气) ;采集方式采用动态多反应监测 (dynamic multiple reaction monitoring, DMRM) 模式, 正负离子同时扫描;氟虫腈砜和氟虫腈亚砜采用负离子扫描, 其余化合物均采用正离子扫描。 2 结果与分析 2.1 甲硫威、甲拌磷选择 在ESI 文献[4]中的涕灭威砜、苯线磷砜、甲硫威砜、甲拌磷砜选择[M+NH 在铵离子环境下, 砜类农药代谢物的这种现象可能与其结构有关。 另外, 对于倍硫磷砜来说, 2.2 流动相的峰面积 为保证各农药化合物具有良好的峰形和足够的灵敏度, 考察体系A:甲醇-含体积分数0.1%甲酸5 mmol/L乙酸铵溶液、体系B:乙腈-含体积分数0.1%甲酸5 mmol/L乙酸铵溶液、体系C:甲醇-5 mmol/L乙酸铵溶液3种流动相体系, 以7种农药及其代谢物的质量浓度为20μg/L为实验条件, 3种流动相体系下农药的峰面积比较见图2。 大部分农药及其代谢物在流动相体系C中的峰面积较高, 苯线磷及其代谢物苯线磷砜和苯线磷亚砜、倍硫磷及其代谢物倍硫磷砜和倍硫磷亚砜、氟虫腈及其代谢物氟虫腈砜和氟虫腈亚砜、甲硫威、甲拌磷及其代谢物甲拌磷砜和甲拌磷亚砜13种农药的峰面积在有机相为甲醇的流动相体系中是有机相为乙腈体系中的1.5~7.3倍;其余7种农药在体系A中的峰面积是体系B中的0.9~1.4倍。在含甲酸和不含甲酸的流动相体系中, 大部分农药的峰面积和峰形无明显变化, 倍硫磷、甲拌磷亚砜的峰面积在不含甲酸的流动相体系中是含甲酸流动相的1.4倍和2.9倍, 苯线磷、苯线磷砜、倍硫磷砜、倍硫磷亚砜、氟虫腈、氟虫腈亚砜的峰面积在含甲酸的流动相体系中是不含甲酸的流动相体系的1.2~1.6倍。综合考虑最终选择甲醇-含0.1%甲酸5 mmol/L乙酸铵溶液作为流动相。 2.3 甲醇-水萃取法 由于前处理中样品采用乙腈提取, 农药及其代谢物的最终溶剂为乙腈, 但是上机分析发现, 流出较早的涕灭威亚砜 (5.74 min) 出现峰展宽、峰分叉现象, 峰面积重现性差, 取500μL净化液在氮气下吹干, 加入500μL甲醇-水 (1∶1, V/V) 混匀后上机分析, 涕灭威亚砜峰形显著改善, 峰面积显著提高, 如图3所示。 在反相高效液相色谱中, 溶剂强度顺序:水 (最弱) 甲醇乙腈乙醇四氢呋喃丙醇二氯甲烷 (最强) 2.4 净化条件的选择 考察单独C 2.5 一般效应 当采用ESI时, 样品基质的存在会对目标物的电离产生抑制而增强的作用, 即基质效应。基质效应的存在会相应地影响所建方法的性能参数 2.6 方法验证 2.6.1 线性关系和定量限制 由表2可知, 7种农药及其代谢物的基质匹配标准曲线在5~100μg/L质量浓度范围内均能呈现出较好的线性关系, 相关系数R 2.6.2 样品前处理方法 向空白菠菜样品中添加10、20μg/kg的混合标准工作液, 需要高、中、低3个添加量, 并考虑LOQ和最大残留限量, 每个水平设置6个平行