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响应面法优化碱法提取玉米芯中木聚糖工艺 木聚糖是自然界的丰富再生资源。这是自然界中最常见的糖。木聚糖是一种五碳醛糖,为无色至白色结晶或针状性粉末,不易被人体消化吸收、低热值,不易被腐败菌发酵,具有明显的双歧杆菌活性,能够起到调节人体生理功能,增加机体免疫力,预防疾病发生等作用。另外,木聚糖类半纤维素是一类取之不尽而又待开发的可再生资源,经酶水解可生产国际市场上急需的低聚木糖、木糖等疗效食品。其降解后所产生的木糖和少量其他单糖,可以用作基本碳源生产各种发酵产品,包括有机酸、氨基酸、单细胞蛋白、燃料乙醇、木糖醇等。作为生产低聚木糖及发酵产品的原料,木聚糖的提取和木聚糖的水解是关键步骤。 玉米是世界三大粮食作物之一,据联合国粮农组织(FAO)报道,世界玉米种植面积1.35亿hm,我国位居世界第二,玉米年产量1.1亿t左右,全国有玉米芯资源2750万t,玉米芯中木聚糖的含量高达35%~40%。王萍、邵佩兰等利用碱法提取小麦麸皮中的木聚糖发现,Na OH浸提法是提取木聚糖的首选方法。本实验以玉米芯为原料,通过响应面法对碱法提取木聚糖的提取工艺进行优化,为玉米芯资源的利用提供了基础数据,具有重要的生态效益和经济效益。 1 材料和方法 1.1 材料和试剂 玉米芯取自大庆市郊区;木糖、3,5-二硝基水杨酸北京奥博星生物技术有限公司;乙醇、氢氧化钠等为国产分析纯。 1.2 方法 1.2.1 玉米芯的粉碎 选择干燥的、无虫蛀、无霉变的玉米芯,先用锤子敲碎成小块,然后置于粉碎机中粉碎,过40目筛,备用。 1.2.2 naoh溶液的制备 准确称取玉米芯10g,加220m L 10g/100m L Na OH溶液,100℃搅拌浸提2.5h,离心,取上清液、过滤、定容、待测。 1.2.3 ,5-二苯基水杨酸溶液ds 分别取标准木糖液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9m L于25m L比色管中,加水至1.0m L,再加入3m L 3,5-二硝基水杨酸(DNS)溶液。在沸水浴中蒸煮5min,立即冷却,定容后摇匀,以没加木糖的溶液作对照,在500nm处测定其吸光度,以木糖质量浓度对吸光度作图,确定木糖标准曲线。 1.2.4 还原糖含量的测定 取一定量的木聚糖溶液,调节p H值至5,加入4倍体积无水乙醇,4℃静置过夜,然后3000r/min离心15min,取沉淀,加入一定量的7%H2SO4于100℃水解2 h,中和、定容、过滤,测定滤液的还原糖质量,将其乘以木聚糖聚合因数0.9作为木聚糖质量。还原糖的测定采用DNS法。 式中:m为木聚糖质量/mg;M为原料质量/mg。 1.2.5 单因素试验 1.2.5. 1处理时间的限制 将处理时间调至1、2、3、4、5h,固液比1:20,碱液质量浓度20g/100m L,90℃条件下进行提取。 1.2.5. 2.固液体比的影响 将固液比调至1:10、1:20、1:30、1:40、1:50,处理时间3h,碱液质量浓度20g/100m L,90℃条件下进行提取。 1.2.5. 3碱性溶液的质量浓度的影响 将碱液质量浓度调至5、10、15、20、25g/100m L,固液比1:30,处理时间3h,90℃条件下进行提取。 1.2.5. 4.温度处理的影响 将处理温度调至6 0、70、80、90、10 0℃,碱液质量浓度20g/100m L,固液比1:30,处理3h进行提取。 1.2.6 响应面优化试验 在单因素试验基础上,根据中心组合试验设计原理,以木聚糖得率为指标,设计4因素5水平响应面分析试验,因素水平编码见表1,数据用Design Expert软件分析确定最优发酵工艺参数。 2 结果与分析 2.1 标准曲线的建立 以木糖质量浓度为X轴、吸光度为Y轴,绘制标准曲线图,由标准曲线图可得回归方程y=0.8636x+0.0164,相关系数R2=0.9969,在0.2~0.9g/L范围内木糖质量浓度和吸光度有良好线性关系。 2.2 不同因素对木聚糖产量的影响 2.2.1 木聚糖得率的变化 由图1可知,随着处理时间的延长木聚糖得率先增加后减少,1~3h增加明显,3~5h有较小幅度降低,处理3h时木聚糖得率最高,所以处理时间以3h较好。 2.2.2 固溶液比对木聚糖的得到率的影响 由图2可知,随着固液比的增大木聚糖得率先增加后减少,在1:30时得率最高,所以固液比以1:30较好。 2.2.3 碱性溶液的质量浓度对木聚糖的得到率的影响 由图3可知,随着Na OH质量浓度的增加,木聚糖得率逐渐增加,以25g/100m L Na OH较好。 2.2.4 温度对木聚糖的得率的影响 由图4可知,随着提取温度的升高,木聚糖提取率先逐渐增加后有所降低,以9 0℃木聚糖得率最高。 2.3 反应法优化了玉米芯中木聚糖的提