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白芍提取物对抑郁症模型大鼠的抗抑郁作用及机制研究 白芍，苦而酸，性微寒，归肝脾经。具有养血敛阴,柔肝止痛,平抑肝阳之功效。白芍既能养肝血,又能柔肝体,最能顺应肝之特性,是治疗肝郁有一无二之品。现代研究表明白芍水煎剂有抗抑郁作用,而白芍治疗抑郁症的物质基础还不清楚,其药理机制研究还未见报道。笔者采用乙醇提取、大孔树脂精制的方法制备白芍提取物,并控制提取物中芍药苷和芍药内酯苷的含量(芍药苷48.89%和芍药内酯苷18.99%),观察其对慢性应激抑郁模型大鼠行为学及脑前额皮质单胺类神经递质的影响,探讨白芍抗抑郁的有效部位,并初步探讨其作用机制,为白芍的临床应用提供依据。 材料和方法 1. 材料和机器 1.1 gg SD雄性大鼠,体质量240-260g,由北京维通利华公司提供,合格证号:SCXK(京)2007-0001。所有动物提前1周购入,常规饲养。 1.2 救赎合成酯 受试药物:白芍提取物(含48.89%芍药苷和18.99%芍药内酯苷),由北京欧纳尔生物工程技术有限公司提供。阳性药盐酸氟西汀(Fluoxetine,Prozac百忧解),礼来苏州制药有限公司,批号:A333341。 1.3 阿利克仑的合成、羟基化试剂、dhba和双酰甲基zea的合成 蔗糖(北京国华化学试剂厂),去甲肾上腺素(NE)(Serva公司),多巴胺(DA)(Fluka公司),肾上腺素(E)、5-羟色胺(5-HT)、5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)、高香草酸(HVA)、3,4-二羟基苯乙酸(DOPAC)、3,4-二羟苄胺(DHBA)(均为Sigma公司),二正丁胺(上海化学试剂采购站进口分装),B-8离子对试剂(天津化学试剂二厂),甲醇(优级纯,北京化工厂)。 1.4 大鼠行为检测仪器 烘箱,大鼠固定笼,止血钳,水桶,温度计,1/100秒表,大鼠行为观察敞箱,大鼠跳台反应箱,Waters高效液相色谱仪厂家(美国Waters公司)。 2. 方法 2.1 各组大鼠一般资料量、模型型、0.0.d-1的模型水平 正常SD大鼠72只,24h禁水不禁食后,给予1%蔗糖水,测定1h内的消耗量。根据蔗糖水消耗量随机分成6个组,每组12只,即空白组、模型组、白芍提取物高(70mg.kg-1.d-1)、中(35mg.kg-1.d-1)、低(17.5mg.kg-1.d-1)剂量组、阳性药盐酸氟西汀组(2.5mg.kg-1.d-1)。造模同时给药,每日1次,连续给药21d。各组均按1.0m L/100g灌胃给药,每周称1次体质量。空白组给予去离子水。 2.2 单笼饲养,单笼饲养 参照文献方法,4℃冰水游泳(5min)、45℃热烘(5min)、夹尾(1min)、潮湿饲养(潮湿垫料)、昼夜颠倒(24h),禁食(24h),禁水(24h)等刺激随机安排到21d内,每日给予1种刺激,除空白组外其余动物均采取单笼饲养,自由饮食。室温(24±1)℃,相对湿度(60±10)%。 2.3 行为观察 2.3.1 糖水消耗 2.3.2 动物双侧双侧活动评分 敞箱高40cm,长和宽均为80cm,无盖,周壁和箱底均为黑色,底面划分为面积相等的25块方格。以动物穿越方格数作为水平活动得分,以直立次数为垂直活动得分(两前肢离地1cm以上)。每只动物进行1次测定,每次3min。 2.3.3 动物试验和过一、作用后发达 实验装置为1个30cm×30cm×30cm的有机玻璃箱,底面是铜栅,间距为0.8cm,可以通电,电压由1变压器控制。箱子左后角置于1高5cm、直径为8cm的木头平台。将动物放入反应箱内适应环境3min,然后立即通36V交流电,动物受到电击,正常反应是跳上平台以躲避伤害性刺激。多数动物可能会再次或多次跳至铜栅上,受到电击后又迅速跳回平台,如此训练5min,大鼠受到电击的次数为错误次数。24h后重做测验,将大鼠置于平台上,通电并记时,记录5min内的错误次数。 2.3.4 高效液相色谱-电化学分析 各组大鼠在实验第22d跳台实验完成后,动物断头处死,迅速在冰上剥离大脑,取前额皮质,称重后置组织冷冻管中用液氮快速冷冻后,放入-70℃冰箱保存至测定。根据脑组织的重量,加入预冷的0.1mol/L过氯酸(内含0.3m MEDTA二钠和0.5m M亚硫酸钠),2μg/m L DHBA,超声匀浆,11 000r/min离心10min,上清液用于神经递质测定。采用高效液相色谱-电化学检测器系统(HPLC-ECD)进行测定,色谱条件为:色谱柱为4mm×150mm,Nova-pak C18,5μm(大连色谱中心填装);流动相为50mmol柠檬酸-乙酸钠缓冲液p H3.5(内含1.0mmol B-8离子对试剂,1.8mmol二正丁胺,0.3mmol EDTA二钠,4%甲醇),流速1.0m L/min,玻璃碳工作电极,检测池电