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普洱茶对去甲肾上腺素诱导脂肪分解的影响 乌龙茶是茶叶的一个加工品种。这是属于茶科植物茶科的芽和叶。也被称为青茶。它是世界著名的名字。据《本草拾遗》记载,“久食令人瘦,使不睡”。近代研究表明,茶叶中含有茶叶皂甙和咖啡因等,有兴奋、利尿、抑菌等作用。对于减肥的物质基础和减肥机制的研究尚少报道,本研究旨在从乌龙茶中分离减肥因子并阐明其减肥机制。 1 材料和方法 1.1 酸甘油酯、胰脂肪酶和胶原酶 [3H]三油酸甘油酯([3H]triolein):购自日本东京Amersham公司;三油酸甘油酯(Triolein)、胰脂肪酶,咖啡因购自Sigma公司;去甲肾上腺素:购自日本东京Daichi Pharmacy公司;胶原酶(Ⅳ型):购自纽约Worthington Biochemical公司;牛血清白蛋白(BSA)、甘油三酯试剂盒购自大阪和光纯药工业公司。 1.2 植物材料 乌龙茶购自中国福建省,二级。 1.3 动物 Wistar雄性大鼠,6 w龄,180 g(爱媛大学实验动物中心);ICR系雌性小鼠(3 w龄,21 g)购自大阪CLEA公司。 1.4 ymc-pcr法检测脂肪分解 乌龙茶100 g,沸水煮1 h,减压浓缩,得棕色提取物33 g(有脂解活性);取5 g提取物用超孔滤膜按分子量大小分成6部分。分子量小于0.99 μ的组分对脂肪分解作用最强,在浓度为1 g/L时,对去甲肾上腺素诱导脂肪分解作用159.9%。于是将分子量小于0.99 μ组分上HPLC(柱:YMC-Pack ODS-AM 302,4.6 mm ID×150 mm),流速1.0 ml/min,洗脱液:10 %乙腈含有0.1%三氟乙酸(TFA)的水溶液,检测波长:210 nm,样品浓度:50 g/L,柱温:20 ℃。得到一个具脂解活性的物质,经与标准咖啡因比较,光谱数据一致,因此被鉴定为咖啡因,收率为3.39 %。 1.5 实验动物和肝脏的检测 ICR系雌性小鼠(3 w龄,21 g)54只,分成3组,每组18只。对照组小鼠喂饲普通固形饲料(购自日本大阪CLEA公司);高脂组:饲料含牛脂40%,酪蛋白36%,玉米淀粉10 %,糖9 %,混合维生素1%,矿物质4 %;乌龙茶组:高脂饲料加5%乌龙茶粉末饲料,实验期10 w之后,乙醚麻醉处死动物,迅速摘除肝脏和子宫周围脂肪。肝脏于-80 ℃储存,供分析用。取肝脏0.5 g用有机溶剂萃取,残渣用甘油三酯检测药盒分析。各鼠的体重每周测定一次,每只鼠的进食量每周记录3次。 1.6 游离脂肪酸测定 按文献方法分取脂肪细胞50 μl置于200 μl Hanks缓冲液(pH 7.4),其中包括25 μl去甲肾上腺素(终浓度0.05 mg/L)和供试化合物25 μl,反应总体积250 μl。游离脂肪酸按文献法测定。释放的甘油以Warnick方法进行测定。 1.7 tes的测定 从三油酸甘油酯释放油酸的释放率来判定脂肪酶的活性。90 μmol/L三油酸甘油酯,12.6 μmol/L卵磷脂,9.45 μmol/L牛磺胆酸置于9 ml的0.1 mol/L N-三(羟甲基)甲基-2-氨基乙磺酸(TES),pH 7.0,含有0.1 mol/L NaCl,超声波处理5 min。测试溶液总体积200 μl,含有下列物质:50 μl供试化合物,50 μl胰脂肪酶(10 U),0.5 μmol/L三油酸甘油酯,0.053 μmol/L牛磺胆酸,0.07 μmol/L卵磷脂,20 μmol/L TES,20 μmol/L NaCl,于37 ℃,pH 7.0的条件下孵化30 min。释放油酸的测定按Belfrage方法进行。脂肪酶活性以每小时每毫升脂肪细胞的nmol/L[3H]油酸表示。 1.8 统计处理 所有数据ˉx±sˉxxˉ±sxˉ来表示。用t检验进行显著性检验。 2 结果 2.1 去甲肾上腺素诱导脂肪分解 乌龙茶水提取物其分子量小于0.99 μ的组分诱导脂肪分解作用最强达159.9%。进而从分子量小于0.99 μ的组分中经HPLC分离得到的组分B,在浓度为1 g/L时,可增强去甲肾上腺素诱导脂肪分解作用达210.9 %。组分B被鉴定为咖啡因(表1)。 2.2 运行情况不同,导致体重、莲子周围脂肪组织的下降 表2显示,高脂组由于饲高脂饲料造成甘油三酯的积累,从而也诱发脂肪肝的形成,小鼠体重明显增加。而饲乌龙茶饲料组体重、子宫周围脂肪组织和肝中甘油三酯均有所下降。体重的下降率与子宫周围脂肪组织的下降呈相应趋势。在整个实验期间每只鼠的平均消费量对照组与高脂组比较差异显著(P0.05)。但高脂组与乌龙茶组无明显差异。这些结果提示,乌龙茶可能防止高脂饲料引起的肥胖和脂肪肝。 2.3 细胞蛋白分解作用 咖啡因在较低的浓度(5×10-6mol/L)下就能增益去甲肾上腺