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橘叶黄酮类成分的分离鉴定及薄层色谱鉴别研究 橙色叶是广州植物的橙色叶及其种植变体。性平、苦、辛。具有平肝健脾、散粘液、结果化等功效。橘叶应用历史悠久,《本草纲目》、《本草从新》等书中都有记载;现代“乳块消片”等成药中也应用了橘叶。橘叶主要含有挥发油、碳水化合物、黄酮类等成分,有关橘叶质量控制方面研究仅见橙皮苷含量测定的报道。为了完善橘叶药材的质量控制研究,为进一步制定其质量控制标准提供科学依据,本研究进行了橘叶黄酮类成分研究与薄层色谱鉴别,现报道如下。 1 仪器和试剂盒 1.1 超声-质谱分析系统 Bruker AVANCE AV 400型超导脉冲傅里叶变换核磁共振谱仪[瑞士Bruker公司,溶剂为氘代二甲亚砜-D6(DMSO-d6)],ZY-600U薄层色谱自动成像分析系统(北京先驱威锋技术开发公司),LK-400药用粉碎机(浙江城关红利数控制造厂),BP211D型电子分析天平(德国Sartorius 公司),KQ-500型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。 1.2 橘叶的生长和来源 柱层析硅胶(200-300目)和硅胶G-254 薄层板均由青岛海洋化工厂分厂生产,环己烷、乙酸乙酯、硫酸、乙醇等试剂均为分析纯。橘叶样品共5批,采自不同产地,经广州中医药大学中药学院林励研究员鉴定,其原植物均为橘Citrus reticulataBlanco。采样信息详见表1。 2 方法和结果 2.1 环己烷乙酸乙酯的制备 取药材 2 kg,加 8 倍量乙醇回流提取 3 次,每次 1.5 h ,滤过,合并滤液,减压回收乙醇,得总浸膏 180 g。浸膏加入适量水分散,用乙酸乙酯萃取至无色,萃取液减压浓缩得到乙酸乙酯部分浸膏。粗提物乙酸乙酯部分进行反复硅胶柱层析,洗脱剂为环己烷 ∶乙酸乙酯(体积比100∶1～1∶100);分离得到化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ。 2.2 化合物乙酸乙酯 化合物Ⅰ:黄色针晶(乙酸乙酯),熔点(mp)141℃～142℃。氢核磁共振(1H-NMR)(DMSO-d6,400 MHz) 化学位移值(δ):12.71(5-OH),7.07(1H,s,H-3),7.71(1H,dd,J=8.64,2.12 Hz,H-6′),7.59(1H,d,J=2.12 Hz,H-2′),7.18(1H,d,J=8.64 Hz,H-5′);碳核磁共振(13C-NMR)( DMSO-d6,100 MHz) δ:163.61(C-2),103.57(C-3),182.61(C-4),145.22(C-5),135.81(C-6),152.34(C-7),132.57(C-8),148.48(C-9),106.20(C-10),122.75(C-1′),109.28(C-2′),149.02(C-3′),152.48(C-4′),111.87(C-5′),119.99(C-6′),61.77(6-C),61.43(7-C),60.50(8-C),55.74(3′-C),55.70(4′-C)。以上数据与文献中5-去甲川陈皮素一致,故鉴定化合物Ⅰ为5-去甲川陈皮素(5-demethyl-nobiletin),分子式为C20H20O8,分子量为388。 化合物 Ⅱ:白色针晶(乙酸乙酯),mp 153℃～154℃。1H-NMR( DMSO-d6,400 MHz) δ:6.75(1H,s,H-3),8.00(2H,d,J=9.00 Hz,H-2′,H-6′),7.14(2H,d,J=9.00 Hz,H-3′,H-5′),4.03(3H,s,OCH3),3.97(3H,s,OCH3),3.86(3H,s,OCH3),3.84(3H,s,OCH3),3.79(3H,s,OCH3);13C-NMR( DMSO-d6,100 MHz) δ:161.95(C-2),106.02(C-3),175.67(C-4),143.51(C-5),150.87(C-6),137.68(C-7),147.46(C-8),147.07(C-9),114.62(C-10),123.04(C-1′),127.70(C-2′,C-6′),114.25(C-3′,C-5′),160.30(C-4′),61.83(5-C),61.78(6-C),61.44(7-C),61.32(8-C),55.46(4′-C)。以上数据与文献中橘红素一致,故鉴定化合物 Ⅱ为橘红素(tangeretin),分子式为C20H20O7,分子量为372。 化合物 Ⅲ:白色针晶(乙酸乙酯),mp 134℃～135℃。1H-NMR( DMSO-d6,400 MHz) δ:6.85(1H,s,H-3),7.65(1H,dd,J=8.60,2.12 Hz,H-6′),7.55(1H,d,J=2.12 Hz,H-2′),7.1