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火龙果果皮花青素提取工艺的优化 龙眼含有丰富的对人体有益的营养成分。它的果皮含有大量的休耕白（大多数红色肉），具有良好的物理稳定性。与其它天然色素相比, 火龙果的果皮花青素具有原料来源方便、廉价、低成本、无污染等特点, 且稳定性好, 抗氧化性较强。本实验主要以火龙果果皮为材料, 提取其中的花青素。并考察其稳定性的影响因素及最优提取条件, 使其对实现火龙果果皮中花青素的开发利用具有现实意义。通过这些初步研究, 试图为火龙果果皮中花青素的综合开发和利用提供实验基础和理论依据。 1 醇、甲醇、浓盐酸 火龙果, 丙酮、甲酸、乙腈、乙酸、乙醇、甲醇、浓盐酸均为分析醇。 p H检测仪、恒温水浴锅、分光光度计、电子天平、超声波粉碎细胞仪、匀浆机。 2 方法 2.1 吸光度测定 使用7种提取剂 A:丙酮:水:甲酸=60:15:0.1 B:乙腈:乙酸=48:2 C:乙醇:水:乙酸=40:10:0.15 D:甲醇:水:乙酸=85:15:0.15 E:0.10 mol·L-1盐酸-甲醇溶液 F:0.05 mol·L-1盐酸-甲醇溶液 G:0.10 mol·L-1盐酸-乙醇醇溶液 提取火龙果果皮花青素, 24 h后测定其在400~600 nm吸收情况, 实验结果见表1。 2.2 单次提取定容液d 称取2 g果皮破碎物放入烧杯中, 加20 m L0.1mol·L-1盐酸-乙醇溶液, 均匀搅拌10 min, 在40℃水浴中加20 m L溶液D提取30 min, 把溶液倒入50 m L容量瓶中, 再加5 m L溶液D提取10 min, 最后定容至50 m L。 以盐酸-乙醇溶液做参比, 使用分光光度计测定提取液在530、620、650 nm下的吸光度。 2.3 单因素实验 2.3.1 料液比的确定 在果皮破碎物1 g, 温度40℃, 提取时间30 min, 提取次数为1的条件下, 取料液比1:5、1:10、1:20、1:40分别进行实验。 2.3.2 提取时间 在果皮破碎物1 g, 提取次数1, 温度40℃, 料液比1:10的条件下, 取5、15、30、60、90 min分别进行实验。 2.3.3 提取温度 在果皮破碎物1g, 时间15 min, 提取次数1, 料液比1:10的条件下, 取20、30、40、50、60℃分别进行实验。 2.3.4 ph的测定 在果皮破碎物1g, 温度40℃, 时间15 min, 提取次数1, 料液比1:10的条件下, 取p H=1.45、1.95、2.45、2.95、3.45、3.95分别进行实验。 2.3.5 提取时间 2.3.6 微波破碎细胞 取3个烧杯标号1、2、3, 分别称取2 g果皮破碎物放入三个烧杯中, 分别加入加20ml 0.1mol·L-1盐酸-乙醇溶液。 1号:玻璃棒搅拌5 min后进行超声波破碎, 条件:超声时间7 s、间隔时间8 s、次数30、功率40 w、温度35℃; 2号:玻璃棒搅拌5 min后进行微波破碎, 条件:低火5 min 3号:室温下搅拌10 min。 在40℃水浴中加20 m L溶液D提取30 min, 分别把溶液倒入50 m L容量瓶中, 再加5 m L提取剂, 定容, 静置10 min。 测定:以盐酸-乙醇溶液做参比, 使用分光光度计测定其在530、620、650 nm下的吸光度。 2.4 试验方案及结果 以单因素实验结果为基础, 选实验结果影响较大的因素, 即时间, 温度, p H作为正交试验因素进行L9(34) 正交试验。试验因素水平表见表4, 试验方案及结果见表5。 花青素提取量的计算公式: 花青素的吸光度A= (OD530-OD620) -0.1 (OD650-OD620) 花青素提取量 (mg/g) =1000 AV/ab W A:花青素的吸光度 a为吸光系数 (由文献可知花青素的a=0.0775) , 单位L/ (g/cm) b为液层厚度 (通常为比色皿的厚度) , 单位cm W为样品质量, g V为提取剂体积, ml。 3 结果与分析 3.1 提取剂的确定 由表1分析得出:提取剂C、D、E、F、G提取得到的为花青素, 同时确定溶液D为最佳提取剂, 最大吸收峰为536 nm。 3.2 预实验 花青素的吸光度A=0.2654 花青素提取量 (mg/g) =85.6 3.3 单因素试验的结果分析 3.3.1 确定混合溶液的比例 3.3.2 min后患儿的变化 由图2分析得出:随着时间的增加, 提取率呈现波动性增长, 在15 min后逐渐呈现规律性下降趋势, 15 min时达到最大。最终确定15 min为最佳提取时间。分析得到花青素受提取时间的影响比较大, 且时间过长可能导致花青素的破坏。 3.3.3 吸光度的影响 由图3分析得出:随着温度的增加, 提取率有所增加, 但增加到