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丹参的薄层色谱鉴别 丹参是一种常见的中药，主要含有脂溶性和可溶性成分。《中国药典》2005年版中对丹参进行了鉴别,但现有鉴别方法不理想。本文通过对提取方法和色谱分离条件进行完善,建立了专属性强、重现性好的薄层鉴别方法和丹参药材鉴别对照图谱。 1 药品、文献及对照药材的鉴定 ZF-2型三用紫外仪(上海狮安亭电子仪器厂);双槽展开缸(20cm×10cm),定量毛细管(定量用);高效薄层板(Merck,25TLC aluminium sheets 20cm×20cm,批号:OB547150);试剂均为分析纯。 对照品:丹参酮ⅡA(批号:110766-200416)、丹参酮Ⅰ(批号:0867-200205),隐丹参酮(批号:852-993)、二氢丹参酮Ⅰ(批号:868-200002)和丹酚酸B(批号:111562-200504)(中国药品生物制品检定所);对照药材:丹参(Radix Salviae Miltiorrizae,批号:12093-2005509,中国药品生物制品检定所)。 丹参样品[样品大部分为山东栽培品种,采自丹参主要产区,另有安徽亳州、河北安国栽培品种。经山东中医药大学石俊英教授鉴定分为丹参(Salvia miltiorrhiza Bge.) 干燥根及根茎;白花丹参(Salvia miltiorrhiza Bge.f.alba)]。 2 方法和结果 2.1 第三,对照品色谱测定 取药材粉末(过60目筛)约1g,加乙醚50mL,置索氏提取器中,加热回流提取至无色,回收乙醚至干,放至室温,残渣加乙酸乙酯1mL使溶解,转移至具塞刻度试管中,加乙酸乙酯制成1mL溶液,作为供试品溶液。另取丹参对照药材1g,同法制备对照药材溶液。再分别取丹参酮ⅡA、丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、二氢丹参酮Ⅰ对照品适量,用乙酸乙酯溶解,制成约每1mL含0.5mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录Ⅵ B)试验,吸取上述3种溶液各4μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以正己烷-乙酸乙酯-甲酸(30∶10∶0.5)为展开剂,展开,取出,晾干。在紫外灯(254nm)检视。结果供试品色谱中,在与对照药材相同的位置上,显相同颜色斑点;在与对照品色谱相同的位置上,显相同颜色斑点。见图1。 2.2 高效薄层色谱试验 取药材粉末(过60目筛)约0.2g,置具塞三角瓶中,精密75%甲醇25mL,置水浴中,加热回流提取1h,放冷,滤过,置水浴上,蒸干,残渣加75%甲醇使溶解,转至具塞刻度试管中,制成1mL溶液,作为供试品溶液。另取对照药材0.2g,同法制备对照药材溶液。再取丹酚酸B对照品适量,用75%甲醇溶解,制成约每1mL含1.0mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录Ⅵ B)试验,吸取上述样品溶液和对照品溶液各2μL,分别点于同一硅胶GF254高效薄层板上,以甲苯-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(2∶3∶4∶0.5∶2) 为展开剂,展开,展距12cm,取出,晾干,置紫外光灯(254nm)下观察淬灭斑点,供试品色谱中,在与对照药材相同的位置上,显相同颜色斑点;在与对照品色谱相同的位置上,显相同颜色斑点。见图2。 3 讨论 3.1 提取溶剂的选择 丹参脂溶性成分的提取:分别以三氯甲烷、乙醚、乙酸乙酯、石油醚(30~60℃)、二氯甲烷-甲醇(8∶2)为溶剂,进行提取效果的分析。结果选用乙醚提取效果较好,毒性小。 3.2 各种展开剂分离乳化成分的比较 据文献资料所用的展开系统有甲苯系统,三氯甲烷系统等,通过试验比较,结果以甲苯-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(2∶3∶4∶0.5∶2)为展开剂分离丹参水溶性成分较好。以正己烷-乙酸乙酯-甲酸(30∶10∶0.5 )为展开剂分离丹参脂溶性成分较好。 3.3 参脂水溶液展开距离 在相同色谱条件条件下,考察了不同展开距离对薄层分离效果的影响,结果分离丹参脂溶性成分,展开距离应在8~10cm,超过10cm,色谱斑点扩散严重,边沿效应增加。分离丹参水溶性成分,展开距离应在10~12cm,不应少于10cm,否则斑点分离度降低。