3株常规球拟酵母菌氟康唑的生物学特性及表型鉴别.docxVIP

3株常规球拟酵母菌氟康唑的生物学特性及表型鉴别 1952年，洛德和克里克首次报告了普通细菌，并将其分类为囊性菌。1978年，它被归类为蘑菇科。临床虽不多见, 但因对氟康唑多数不敏感, 将其准确鉴定到种对其感染患者的治疗至关重要。国内目前尚未见该菌的相关报道。我们对临床标本分离的3株平常念珠菌生物学特性及与其表型特征相关的念珠菌的鉴别进行了探讨, 现报告如下。 1 材料和方法 1.1 来源：蘑菇 3株平常念珠菌中1株从颅内感染患者的导尿标本分离, 另2株来自气管炎和类风湿性关节炎患者的痰标本。 1.2 dida产色培养基 沙氏培养基 (自制) ;ChromagarCandida产色培养基 (法国科码嘉公司) ;Vitek 2 lD-YST 酵母菌鉴定卡 (法国生物梅里埃公司) ;七叶苷微量鉴定管 (杭州天河公司) 。 1.3 仪器限制器 2微生物鉴定仪和药敏试验系统 (法国生物梅里埃公司) 。 1.4 芽管及芽管分离 临床送检痰、尿标本常规接种沙氏培养基, 25 ℃培养24～48 h。取沙氏培养基菌落接种血清, 37 ℃孵育2 h观察芽管产生情况;接种玉米吐温-80培养基25 ℃培养, 24、48、72 h分别观察厚膜孢子、菌丝生长情况;接种ChromagarCandida产色培养基, 37 ℃培养观察菌落颜色。 1.5 氟康唑目标产物的合成 根据2003年NCCLS酵母菌纸片扩散法药敏标准M44-P检测氟康唑敏感性。菌液浓度为0.5麦氏单位, 用无菌棉拭子涂含20 g/L葡萄糖和0.5 μg/ml美蓝的M-H培养基, 35 ℃培养24 h判读结果。氟康唑纸片含量25 μg/片, 判断标准为敏感 (S) ≥19 mm, 耐药 (R) ≤14 mm。质控菌株为白念珠菌ATCC 90028, 质控范围为28～39 mm。 1.6 七叶酸脱水试验 将菌株接种于七叶苷微量鉴定管25 ℃培养, 分别于24、48、72 h观察结果。 2 病原菌生长 3株菌在沙氏培养基上均生长白色、光滑、湿润的酵母样菌落。血清芽管阴性;24、48、72 h显微镜观察玉米吐温-80培养基, 均无厚膜孢子和菌丝生长。产色培养基上菌落为无色。用Vitek 2 ID-YST卡鉴定3株菌均为平常念珠菌/挪威念珠菌 (Candida inconspicua/norvegensis) 。根据形态学及七叶苷水解试验24、48、72 h均为阴性, 最后鉴定为平常念珠菌。氟康唑药敏试验ATCC 90028抑菌圈为33 mm, 而3株临床菌虽敏感但均接近剂量依赖性敏感 (DDS) 判断标准 (18 mm) 分别为19、22、23 mm。 3 滑三菌的鉴定 平常念珠菌为条件致病菌, 临床并不多见。根据实验室鉴定程序, 血清芽管试验阴性且在玉米吐温-80培养基上不形成菌丝, 一般报告为光滑念珠菌。如用产色培养基, 光滑念珠菌菌落呈紫色。而平常念珠菌虽在玉米吐温-80培养基上不产生菌丝, 但在产色培养基上菌落呈无色。如无产色培养基, 很容易误鉴定为光滑念珠菌。本文报告的目的主要想提示用手工方法鉴定念珠菌时, 在玉米吐温-80培养基上不产生菌丝的念珠菌除光滑念珠菌外还有其他念珠菌需要鉴别。区别平常念珠菌与光滑菌的简单试验除产色培养基菌落有无颜色外, 比较其在玉米吐温-80培养基上的孢子大小也可区别。光滑念珠菌孢子直径一般为2～3 μm, 明显比其他念珠菌孢子 (直径一般为2.5～4 μm)小。如有条件还可用同化试验鉴定。另外, 平常念珠菌与其相似菌挪威念珠菌用七叶苷水解试验即可区别。平常念珠菌为阴性, 挪威念珠菌为阳性。 平常念珠菌对氟康唑的药物敏感试验文献报道多为不敏感, 但Majoros等用4种方法 (不包括纸片扩散法) 检测结果大多数为浓度依赖性敏感。我们用2003年NCCLS推荐的纸片扩散法检测, 3株菌对氟康唑虽敏感, 但抑菌圈直径接近浓度依赖性敏感折点。推测既有方法学差异, 也存在平常念珠菌具有潜在耐氟康唑特性, 用氟康唑治疗后再做药敏试验可能会变为耐药。对此, 我们将进一步收集菌株和临床资料对此问题进行探讨。