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安度更年汤对围绝经期症状改善作用的实验研究 围绝经期综合征是一种常见的妇科疾病和疾病。随着社会老龄化的到来，社会因素和生活方式的变化，该病往往是年龄开始的，发病率增加。本病的病因病机主要是肝肾阴虚, 治疗重点在肾, 但与肝关系密切, 安度更年汤即是以“补肝肾, 养精血, 调阴阳”为原则研制的纯中药制剂, 是临床行之有效的经验方。本实验通过从内分泌角度探讨安度更年汤对围绝经期综合征的作用机理。 1 材料和方法 1.1 实验动物及许可证 SD雌性清洁级大鼠, 12月龄50只, 体重350-450g, 3月龄大鼠10只, 体重150-180g, 由河南省实验动物中心提供, 动物许可证号:SCXK (豫) 2005-0001。 1.2 血清全型肉毒及解氨剂3种 己烯雌粉片0.5mg×100片, 由合肥久联制药有限公司生产, 国药准字号安度更年汤 (制首乌30 g、覆盆子30 g、菟丝子30 g、山茱萸15 g、补骨脂9 g、当归15 g、茯苓15 g、怀牛膝15 g、葛根15 g、甘草3 g) , 由河南中医学院制剂室提供, 按现代工艺煎制浓缩成浸膏, 高剂量组每毫升含原生药2.95 g, 低剂量组每毫升含原生药1.47 g。 血清雌二醇 (E2) 放射免疫测定试剂盒:北京普尔伟业生物科技有限公司, 批号兔抗ER多克隆抗体:武汉博士德生物公司, 批号:093K0793。 1.3 动物分组及处理 将60只SD大鼠随机分为6笼, 每笼10只, 于适应性喂养7d后阴道细胞涂片, 1次/d, 连续涂片10d。涂片结果:10只青年鼠有规则的动情周期作为青年组;50只12月龄大鼠中52%动情前期延长, 间期缩短或无动情间期出现, 6%单纯动情间期缩短, 22%无明显的动情前期及动情间期, 8%动情周期基本规则, 12%动情周期比较规则, 但阴道细胞角化不完全, 性周期及细胞形态不典型, 选取典型性周期不规则的大鼠40只作为自然围绝经期动物模型。 将50只大鼠随机分为5组:青年组 (A) (10只) 、模型对照组 (B) (10只) 、己烯雌酚组 (C) (10只) 、安度更年汤高剂量组 (D) (10只) 、低剂量组 (E) (10只) 。各组动物连续灌胃30d, 2次/d, 灌胃, A组:生理盐水1m L/100g, B组:生理盐水1m L/100g;C组:己烯雌粉溶液每日灌胃量为1m L/100g, 浓度为0.08mg/kg;D组 (临床用药剂量20倍) :每次灌胃量为1m L/100g, 浓度为生药量:59g/kg;E组 (临床用药剂量10倍) 每次灌胃量为1m L/100g浓度为生药量:29.5g/kg (以上灌胃药物浓度按人鼠折算系数法计算) 。 1.4 试剂盒注定 (1) 血清E2水平:禁食水24h后各组动物取血, 离心, 分离血清, 放免法检测血清E2, 严格按试剂盒说明进行。 (2) 免疫组化法检测子宫ER水平:Envision法制片, 每只大鼠随机抽取两张切片, 切片中选出5个视野镜下观察, 用全自动图像分析系统对阳性染色进行分析, 显微镜高倍视野内计算染色阳性细胞 (阳性细胞呈棕色) 百分比, 作为该切片的代表值, 计算阳性率。 1.5 量资料量表的多重性组间差异比较表1 数据采用SPSS 17.0统计分析软件处理, 计量资料所有数据以 (均数±标准差) 表示, 用单因素方差分析进行多重性组间差异性比较。检验水准α=0.05, P0.05表示有显著性统计学意义。 2 各组患者性别和年龄的比较 见表1。 由表1可知, (1) 围绝经期大鼠血清E2结果比较:方差齐性 (P=0.602) , 各组间比较F=16.309, P=0.0000.01, 差异有显著意义;模型组与青年组相比较P=0.0000.01, 差异有显著统计学意义;己烯组与模型组比较P=0.0000.01, 差异有显著统计学意义;安高组与模型组比较P=0.0000.01, 差异有显著统计学意义;安低组与模型组比较P=0.0460.05, 差异有统计学意义;安低组、安高组及己烯组E2含量均升高, 且各组间比较P0.05, 差异无统计学意义, 其中安低组与青年组比较有差异 (P0.05) ;己烯组、安高组接近青年组水平 (P0.05) 。 (2) 绝经期大鼠子宫ER结果比较:方差齐性 (P=0.169) , 各组间比较F=15.030, P=0.0000.01, 差异有统计学意义;模型组与青年组相比较P=0.0000.01, 差异有显著统计学意义;己烯组与模型组比较P=0.0000.01, 差异有显著统计学意义;安高组与模型组比较P=0.0000.01, 差异有显著统计学意义;安低组与模型组比较P=0.0040.01, 差异有显著